食品科学技术学报201503 - page 65

( 压榨,一级 )、 花生油 ( 压榨 , 一级 )、 葵花籽油 ( 压
榨, 一级)、调和油 、大豆油( 浸出, 一级)、 芝麻油( 压
榨, 一级)、 亚麻籽油 ( 压榨, 一级), 每个种类选取
1 ~ 5 个不同品牌;生育酚标准品:琢鄄 生育酚( 色谱级,
纯度 99郾 8% )、茁鄄 生育酚 ( 色谱级, 纯度 99郾 5% )、 酌鄄
生育酚( 色谱级, 纯度 99郾 0% )、 啄鄄 生育酚 ( 色谱级,
纯度 98郾 3% ),Sigma 公司 ; 无水甲醇 ( 分析纯 ), 北
京化工厂; 甲醇 ( 色谱纯 ),Fisher Scientific; 纯水由
Millipore鄄Q 纯水机自制 。
1郾 2摇 仪器与设备
RE-52A 型旋转蒸发仪,上海亚荣生化仪器厂;
GR-200 型电子分析天平,北京仪诚科技公司;KQ-
400DB 型数控超声波清洗器, 昆山市超声仪器有限
公司;1260 型高效液相色谱系统 ( 配自动进样器、 二
极管阵列检测器 DAD 和色谱工作站等), 美国 Agi鄄
lent 公司。
1郾 3摇 实验方法
1郾 3郾 1摇 色谱条件的选择
安捷伦 ZORBAX SB - C 18 型色谱柱 (150 mm 伊
4郾 6 mm,5 滋m), 柱温 30 益,流动相甲醇与水的体积
比为 98颐 2,等度洗脱 15 min, 流速 1郾 0 mL / min,DAD
检测波长 295 nm,进样量 20 滋L。
1郾 3郾 2摇 标准溶液的配制
精确称取 琢 鄄生育酚、 酌鄄生育酚、啄 鄄生育酚标准品
各 10郾 0 mg,分别用甲醇溶解定容到 10郾 0 mL 棕色容
量瓶中, 各标准储备液质量浓度为 1郾 00 g / L,并放置
冰箱保存。 使用前调至不同质量浓度 , 并用紫外分
光光度法标定其准确质量浓度。
1郾 3郾 3摇 标准溶液质量浓度的标定
分别取生育酚标准溶液 100郾 0 滋L, 用无水甲醇
分别稀释定量至 10郾 0 mL 容量瓶中,在 295 nm 波长
下测定各生育酚的吸光值, 用比吸光系数计算各生
育酚的质量浓度。
计算公式见式(1)。
C1 = A
E 伊 104 伊 V2
V1 伊 10 - 3 。 (1)
式(1) 中,C1 为生育酚标准溶液的质量浓度,g / L;A 为
生育酚的平均紫外吸光值;E 为生育酚 1 % 比吸光系数
( 琢、酌、啄鄄生育酚的 E 值分别以 73,92,93 带入);V2 为标
准测定溶液体积(10郾 0 mL);V1 为标准溶液取用量,mL。
1郾 3郾 4摇 提取条件的选择
以某品牌大豆油为原料,在室温情况下,采用超
声波法进行提取, 将甲醇作为提取溶剂,分别考虑提
取次数 、料液比以及提取时间 3 个条件对提取效果
的影响 。
1) 提取次数的确定。 取 1郾 0 g 大豆油, 加入
10郾 0 mL 甲醇,超声提取 20 min 后将上清液倒出并
再次加入等体积甲醇, 超声相同时间, 以此类推, 共
提取 5 次。
2) 料液比的确定。 将大豆油与甲醇按不同提取
比例 1颐 10,1颐 5,1颐 1郾 67,1颐 1郾 25,1颐 1,1颐 0郾 5(g / mL) 进行
提取,( 样品质量浓度分别为 0郾 1,0郾 2,0郾 6,0郾 8,1郾 0,2郾 0
g / mL),共提取 5 次,每次超声 20 min。
3) 提取时间的确定。 取 1郾 0 g 大豆油, 加入
10郾 0 mL 甲醇, 超声提取时间分别为 10,20,30,40,
50 min,共提取 5 次 ,每次均将上清液倒出并加入等
体积甲醇进行再次提取。
将每次提取出的上清液浓缩至干 ,加 1郾 0 mL 甲
醇溶解过膜 ,用 HPLC 方法进行检测。
1郾 3郾 5摇 加标回收率与精密度
为了考察整个方法的可靠性, 分别对植物油中
大豆油 、调和油、 玉米油的 1 号品牌进行混合生育酚
标准品的加标回收率实验, 分别加入 50,100,150
滋L 质量浓度为 0郾 10 g / L 的混合标准使用液 ,每个
水平重复 3 次,然后按照 1郾 3郾 1 的方法进行测定 。
1郾 3郾 6摇 不同种类植物油中生育酚含量测定
选用市售 8 个不同种类 、不同品牌的植物油作
为样品, 按照优化的方法进行超声提取, 并进行
HPLC 分析。
2摇 结果与分析
图 1摇 生育酚标样的高效液相色谱图
Fig. 1摇 HPLC chromatogram of tocopherol standards
2郾 1摇 工作曲线与检出限分析
生育酚异构体共 4 种物质 ,但用普通 C 18 反相色
谱柱分析时 ,茁 鄄生育酚与 酌鄄生育酚会在同一时间出
峰 ,无法分开 。 琢鄄生育酚、 茁 / 酌 鄄生育酚、 啄鄄 生育酚的
液相色谱如图 1。 在选定的色谱条件下, 测定 琢鄄 生
06 食品科学技术学报 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2015 年 5 月