食品科学技术学报201505 - page 59

了使分析物尽可能地以分子形式存在,通常需控制
流动相的 pH 值来抑制其离子化, 使其在反相柱上
得到保留,从而达到分离的目的。 通过文献检索,常
用的流动相为磷酸盐和磷酸水溶液,分别考察了磷
酸二氢钾( 用磷酸调节 pH 值为 3郾 0) 和 准( 磷酸) =
0郾 1% 水溶液这 2 种流动相,色谱峰峰型和分离度均
较好,但 准( 磷酸) = 0郾 1% 水溶液配制简单易行, 所
以实验选用 准( 磷酸) = 0郾 1% 水溶液为流动相 。
2郾 1郾 2摇 色谱柱的选择
考察了 Phenomenex Luna C18 色谱柱和 Waters
HSS T3 色谱柱, 结果表明,混合标准品进样时,Wa鄄
ters Acquity UPLC HSS T3 色谱柱能较好地分离待测
组分。 后者显示出对极性化合物具有更好的保留同
时对非极性化合物不产生过强的保留,它能够耐受
100% 的纯水流动相不会出现 “ 柱塌陷 冶 的问题 , 而
且在低 pH 流动相条件下具有极好的柱寿命。 结合
待测化合物极性和流动相条件, 选择 Waters Acquity
UPLC HSS T3 色谱柱。
2郾 2摇 提取条件的选择
2郾 2郾 1摇 对高黏性基质的处理
某些淀粉类食品如芋圆、 珍珠粉圆等熟制后黏
性较大,用粉碎机粉碎效果较差,在提取液中分散效
果也不好,不利于目标化合物的提取。 针对上述问
题,采用 Omni THQ 数字组织均质机在提取液中对
上述样品进行均质,可使基质均匀分散于提取液中,
可得到较好的提取效果。
2郾 2郾 2摇 提取液的选择
结合文献和顺丁烯二酸、 反丁烯二酸的理化性
质,对水、 准( 乙醇 ) = 5% 水溶液 、准 ( 甲酸) = 2% 水
溶液和 pH 值 = 5 甲酸水溶液这 4 种提取液对淀粉
及淀粉制品的阴性加标样品的提取效率进行考察,
结果如图 1,准( 甲酸) = 2% 水溶液(pH 值 = 2郾 5) 和
pH 值 = 5 甲酸水溶液对顺、 反丁烯二酸的提取率均
能达到 90% 以上, 由于顺丁烯二酸的 pK a1 = 1郾 92,
pK a2 = 6郾 23,反丁烯二酸的 p Ka1 = 3郾 02,pKa2 = 4郾 38,
为使顺丁烯二酸和反丁烯二酸在提取液中尽可能的
离子化,有利于下一步的固相萃取净化, 选择 pH 值
= 5 甲酸水溶液。
2郾 3摇 固相萃取条件的优化
2郾 3郾 1摇 固相萃取柱的选择
鉴于顺丁烯二酸和反丁烯二酸的 pK a 值, 实验
分别考察了 Oasis WAX、Oasis HLB、ProElut PWA、
Strata SAX 和 Strata X-AW 这 5 种固相萃取柱对顺
图 1摇 不同提取溶剂对提取效率的影响
Fig. 1摇 Effects of different extraction solutions on
extraction yield
丁烯二酸和反丁烯二酸回收率的影响, 结果如图 2,
ProElut PWA 对顺丁烯二酸和反丁烯二酸的回收率都
能达到 80% 以上,故选择 ProElut PWA 固相萃取柱。
图 2摇 固相萃取小柱对顺丁烯二酸和反丁烯二酸回收率
的影响
Fig. 2 摇 Effects of different solid phase extraction cartridges
on recoveries of maleic acid and fumaric acid
2郾 3郾 2摇 洗脱溶剂及用量对回收率的影响
对于混合型弱阴离子交换小柱 ,常见的洗脱溶
剂为 准 ( 氨水 ) = 5% 甲醇溶液 , 但对目标化合物的
回收率稍差 ,在 70% ~ 76% 之间。 因此考虑增加氨
水浓度 ,配制 8% 氨水甲醇溶液能够将目标化合物
完全洗脱, 回收率在 85% ~ 97% 之间, 但洗脱液 pH
值偏大 ,因此采用流动相 0郾 1% 的磷酸水溶液进行
复溶后上机 ,可避免目标化合物在碱性条件下出现
离子化现象 。
实验对洗脱液的用量进行了研究 ,以 3 mL 为单
位 ,分别收集 3,6,9,12 mL 的洗脱液时 ,回收率分别
为 54郾 61% ,74郾 32% ,94郾 64% 和 96郾 18% ,所以实验
选择洗脱液体积为 10 mL,既节省溶剂 ,又提高了检
出限。
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