a郾
V
(
正己烷
)颐 V(
乙腈
) = 1颐 1,DE鄄Spectrum Vc
为
22郾 5 mL,
上样
量
10 mg / 1 mL,
流速
1 mL / min,
固定相保留率
80% ;b郾
V
(
正己烷
)
颐
V
(
乙腈
)颐
V
(
乙酸乙酯
) = 5颐 5颐 1,DE鄄Spectrum Vc
为
22郾 5 mL,
上
样量
10 mg / 1 mL,
流速
1 mL / min,
固定相保留率
77郾 8% ;c郾
V
(
正
己烷
)颐
V
(
乙腈
) 颐
V
(
乙酸乙酯
) = 5颐 5颐 1,DE鄄Spectrum Vc
为
135
mL,
上样量
60 mg / 2 mL,
流速
6 mL / min,
固定相保留率
81郾 5%
图
7摇
苏丹红
郁
样品逆流色谱纯化条件的优化
Fig. 7摇 Optimization of high performance countercurrent
chromatography conditions for Sudan 郁
微提高体系极性
,
调整为
V
(
正己烷
) 颐
V
(
乙腈
) 颐
V
(
乙酸乙酯
) = 5颐 5颐 1,
再进行分离
,
如图
7b,
杂质与
苏丹红
郁
的分离度有了明显改善
。
然后采用该体系
在半制备柱进行了分离
,
如图
7c。
在上述优化条件下
,
在制备柱上对苏丹红
郁
样
品进行分离
,
见图
8。
首先进行放大分离
,
如图
8a,
一次分离所收集
的苏丹红
郁
级分经
HPLC
分析纯度并不理想
。
因此
将各收集级分按纯度合并为两个级分
郁鄄1
和
郁鄄2,
浓缩后分别进行了二次分离
,
如图
8b
和图
8c。
经
过二次分离
,
苏丹红
郁
样品中大部分的杂质得到了
去除
。
苏丹红
郁
样品分离前后的
HPLC
分析见图
9。
由图
9
可知
,
通过二步逆流色谱分离
,
苏丹红
郁
的检测纯度
(280 nm
下
)
从
84郾 67%
提高到
96郾 6% ,
得率为
48郾 8% 。
在
254 nm
和
500 nm
下的检测纯度
可以分别达到
97郾 16%
和
98郾 32% 。
但是从图
9
中
也可以看出
,
其中仍有一个难以分离的杂质存在
,
需
要以后采取其他手段再进一步纯化
。
3摇
结
摇
论
针对市场上苏丹红对照品良莠不齐的情况及其
a郾
正己烷
颐
乙腈
颐
乙酸乙酯
= 5 颐 5 颐 1 ( v / v),DE鄄MIDI Vc
为
1 000
mL,
上样量
900 mg / 50 mL,
流速
20 mL / min,
固定相保留率
80% ;
b郾 IV鄄1
二次分离
,
上样量
62 mg / 50 mL,
其他条件同
a; c郾 IV鄄2
二
次分离
,
上样量
203 mg / 50 mL,
其他条件同
a
图
8摇
苏丹红
郁
样品的制备性逆流色谱纯化
Fig. 8摇 Preparative high performance countercurrent
chromatography of Sudan 郁
a.
分离前
; b.
分离后
图
9摇
苏丹红
郁
样品分离前后的
HPLC
分析图
Fig. 9摇 HPLC chromatogram of Sudan 郁 crude
sample and purified product
对食品样品中的低含量苏丹红定量检测的准确性可
能存在的影响
,
建立了两种高纯度苏丹红单体的逆
流色谱纯化方法
,
该方法可以有效去除苏丹红样品
中的杂质
,
使苏丹红
域
的检测纯度
(280 nm
下
)
从
97郾 01%
提高到
98郾 42% ,
苏丹红
郁
的检测纯度
(280
17
第
34
卷 第
3
期
摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
李培根等
:
高纯度苏丹红单体的高效逆流色谱纯化研究
