食品科学技术21603 - page 75

图 4摇 不同波长下苏丹红郁的 HPLC 图
Fig. 4摇 HPLC chromatogram of Sudan 郁 at
different detection wavelengths
的杂质含量有差异, 其中 280 nm 下杂质吸收较高。
在 254,280,500 nm 下苏丹红 郁 的检测纯度分别为
88郾 2% ,83郾 8% ,93郾 4% , 可见使用 500 nm 作为检测
波长所得到的检测纯度最高, 难以发现杂质,而使用
280 nm 时其检测纯度大幅下降,所以应使用多个波
长,尤其是 254 nm 和 280 nm 等通用波长对苏丹红
标样纯度进行考究。 本文后续的工作即是采用逆流
色谱对两个苏丹红样品进行了分离纯化, 以提高其
纯度。
2郾 2摇 苏丹红域 的纯化
根据苏丹红的结构特性, 选取非极性的 V( 正己
烷) 颐 V( 乙腈) = 1颐 1 作为分离体系 ,上相为固定相 ,
下相为流动进行分离。 苏丹红域在不同柱体积下分
离的逆流色谱,见图 5。
先实验了少量样品在小体积柱上的分离效果,
杂质与苏丹红域能够完全分离, 如图 5a。 然后逐级
在半制备柱和制备柱上进行了放大分离,如图 5b 和
5c,在较短时间内,都取得了很好的分离结果。
苏丹红域 粗样及分离后各级分的 HPLC 分析结
果见图 6。
由图 6 可知,通过一次逆流色谱分离,样品中主
要的杂质基本完全去除。 苏丹红域 的检测纯度( 峰
面积归一化法,280 nm) 从 97郾 01% 提高到 98郾 42% ,
得率( 产品质量 / 上样量 ) 为 90郾 8% 。 在 254 nm 和
500 nm 下的纯化组分检测纯度也分别可以达到
98郾 01% 和 99郾 79% 。
2郾 3摇 苏丹红郁 的纯化
根据 HPLC 分析可知, 苏丹红郁 样品中杂质较
苏丹红域 中更多,纯度更低,纯化的难度要大 。 同样
先选取非极性的 V( 正己烷 ):V( 乙腈 ) = 1:1 作为
分离体系,上相为固定相, 下相为流动进行分离, 见
图 7。
先实验了少量样品在小体积柱上的分离效果,
如图 7a,杂质与苏丹红郁不能很好分离 。 然后将稍
a郾 DE鄄Spectrum Vc 为 22郾 5 mL, 上 样 量 10 mg / 1 mL, 流 速 1
mL / min,固定相保留率 80% ;b郾 DE鄄Spectrum Vc 为 135 mL, 上样
量 60 mg / 2 mL,流速 6 mL / min,固定相保留率 77郾 8% ;c郾 DE鄄MIDI
Vc 为 1 000 mL,上样量 600 mg / 25 mL,流速 45 mL / min,固定相保
留率 70郾 2%
图 5摇 苏丹红域在不同柱体积下分离的逆流色谱
Fig. 5摇 High performance countercurrent chromatogram of
Sudan域 in different column volumes
a. 粗样;b. 杂质;c. Sudan 域
图 6摇 280 nm 条件下苏丹红域 粗样及分离后各成分的
HPLC 分析
Fig. 6摇 HPLC chromatogram of Sudan域 crude sample and
different fractions under 280 nm
07 食品科学技术学报摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2016 年 5 月