曲线为
Y
= 0郾 001
X
+ 0郾 005,
R
2
= 0郾 983,
线性范围
0 ~ 400 滋g / mL,
其中
X
为儿茶素质量浓度
(mg / mL),
Y
为吸光度
,
检测波长为
510 nm。
利用儿茶素标准
曲线的回归方程计算出不同级性分部中总黄酮含
量
,
结果以每
g
提取物
(
或不同极性分部
)
中所含的
儿茶素质量
(mg / g)
表示
。
1郾 3郾 4摇
HPLC
分析荔枝果肉多酚提取物及其不同
极性分部的多酚组成和含量
称取适量的各待测样品溶解在甲醇中配制成质
量浓度为
5 g / L
的溶液
,
经
0郾 22 滋m
滤膜后采用安
捷伦
1260
型
HPLC鄄DAD
测定
,
参照
Zhang
等
[13]
方
法
。
流动相
:
流动相
A
体积百分数为
0郾 4%
的冰乙
酸
,
流动相
B
为乙腈
,
洗脱梯度为
0 ~ 40 min B 5% ~
25%, 40 ~45 min B 25% ~ 35%,45 ~ 50 min B 35% ~
50% ,
后运行平衡时间
5 min。
色谱柱为
Zorbax SB鄄
C18
反相色谱柱
(4郾 6 mm 伊 100 mm,5 滋m,Agilent
公
司
);
柱温为
30 益;
流速为
1郾 0 mL / min;
进样体积为
20 滋L;
检测波长为全波长扫描
,
以
260,280,320,350
nm
为主要观察波长
。
样品色谱峰与标准品吸收峰
保留时间及波谱图对比定性
,
峰面积外标法定量
,
结
果以每
mg
荔枝果肉提取物中所含的单体酚质量
(滋g / mg)
表示
。
1郾 3郾 5摇
荔枝果肉多酚及其不同极性分部的细胞抗
氧化活性
各样品细胞抗氧化能力
( cellular antionidant as鄄
say,CAA)
测定参考
Wolfe
等
[14]
的方法进行
。
将处
于对数生长期的
HepG2
细胞悬液种到黑壁透明底
96
孔细胞培养板中
,
每孔
100 滋L,
细胞密度约为
(5 伊 10
4
) /
孔
。
板的最外周各孔加入
100 滋L PBS
代
替细胞
,
以减少边缘效应
。
细胞贴壁生长
24 h
后
,
吸除培养基
,
并加入
PBS 100 滋L /
孔清洗各孔一次
。
将
100 滋L
不同质量浓度的槲皮素溶液或不同极性
分部的荔枝果肉多酚提取物
(
用
MEM
培养基溶解
稀释
,
且含有
25 滋mol / L DCFH鄄DA
的荧光素检测
液
)
加入到相应孔中
,
空白对照孔中加入只含有
25
滋mol / L DCFH鄄DA
的荧光素检测液
,
放入培养箱中
继续培养
1 h。
然后去除各孔中的处理溶液
,
用多通
道移液器迅速向各孔中加入
100 滋L
新鲜配制的终
浓度为
600 滋mol / L
的
ABAP
溶液
,
空白孔中用
PBS
代替
。
迅速将细胞培养板放入荧光酶标仪中开始检
测
,
测定条件为
:37 益,
激发波长
485 nm,
发射波长
538 nm,12
个循环
,
每个循环
5 min。
结果以每
mL
荔枝果肉多酚不同极性萃取物的半数最大效应量的
质量
(滋g / mL)
表示
。
1郾 4摇
数据处理
每个样品每个指标重复测定
3
次
,
所有结果用
平均值
依
标准差表示
。
数据分析运用
SPSS 13郾 0
软
件
,
采用方差分析进行统计处理
,
各处理组间的差异
比较用
LSD
法
,
p
< 0 郾 05
有统计学意义
。
运用
Mi鄄
crosoft Excel 2010
软件绘制统计图
。
2摇
结果与分析
2郾 1摇
荔枝果肉多酚不同极性分部的得率
荔枝果肉多酚不同极性分部的得率存在显著性
差异
(
p
< 0郾 05) (
见图
1)。
水相得率最高
(36% ),
正丁醇相次之
(32% )(
p
< 0 郾 05 ),
乙酸乙酯相最低
(16% ),
水相得率分别是正丁醇的
1郾 23
倍
,
是乙酸
乙酯的
2郾 25
倍
。
图
1摇
荔枝果肉多酚提取物分部萃取不同极性分部得率
Fig. 1摇 Yields of fractional extraction of litchi pulp
polyphenol extracts
摇
2郾 2摇
荔枝果肉多酚提取物及其不同极性分部的总
酚含量
荔枝果肉多酚及其不同极性分部的总酚含量存
在显著性差异
(
p
< 0郾 05),
如图
2。
乙酸乙酯相的总
酚质量比最高
(491 mg / g),
是荔枝果肉多酚提取物
的
1郾 22
倍
;
正丁醇相的总酚质量比次之
(462 mg / g),
是
荔枝果肉多酚提取物的
1郾 14
倍
。
水相的总酚质量
比最低
(382 mg / g),
是荔枝果肉提取物总酚的
0郾 95
倍
。
结果表明
,
经过分部萃取
,
荔枝果肉中的多酚主
要富集于乙酸乙酯相和正丁醇相
。
2郾 3摇
荔枝果肉多酚提取物及其不同极性分部的总
黄酮含量
与荔枝果肉多酚提取物相比
,
乙酸乙酯相的总
黄酮含量无显著变化
,
正丁醇相的总黄酮含量显著
33
第
34
卷 第
3
期
摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
温叶杰等
:
荔枝果肉多酚不同极性分部的构成谱及其抗氧化活性比较
