食品科学技术21603 - page 37

价其抗氧化活性, 发现爪哇茶多酚分部萃取物的抗
氧化性与其萃取溶剂极性呈负相关。 张粹兰等[8]
比较了 3 种不同极性溶剂对荔枝果肉多酚提取液中
多酚得率及其抗氧化活性的影响, 发现荔枝果肉不
同极性分部的总酚含量和抗氧化活性存在显著差
异,但是并未涉及多酚组成及含量 。 本文从荔枝果
肉多酚不同极性分部中多酚组成及含量的角度, 揭
示不同极性溶剂分部萃取对荔枝果肉多酚的分离效
果,为荔枝果肉多酚的高效利用提供基础。
1摇 材料与方法
1郾 1摇 材料与试剂
荔枝品种为妃子笑 ( Litchi chinensis Sonn. cv.
Feizixiao),2015 年 6 月采自广东省农业科学院果树
研究所种质资源圃。 没食子酸 (gallic acid)、表儿茶
素 ( epicatechin)、 原花青素 B2 ( procyanidin B2)、 芦
丁( rutin)、 槲皮素( quercetin)、ABAP、DCFH鄄DA 和
福林酚试剂,均购自 Sigma 公司 ;MEM 细胞培养基 、
胎牛血清 ( FBS)、HPLC 级甲醇、 乙酸和乙腈, 购自
Thermo Fisher Scientific 公司; 人肝癌细胞 ( HepG2
细胞),购自中国科学院上海生命科学研究院细胞
资源中心;乙醇、乙酸乙酯、正丁醇 、碳酸钠试剂均为
国产分析纯。
1郾 2摇 仪器与设备
XHF鄄D 型内切式匀浆机,宁波新芝生物技术有
限公司;TD6 型离心机, 长沙湘智离心仪器有限公
司;EYELA N鄄1100 型旋转蒸发仪, 东京理化器械株
式会社;FDU鄄2110 型真空冷冻干燥机 ,东京理化器
械株式会社;LC鄄1260 型高效液相色谱仪 ,Agilent 公
司;UV鄄1800 型紫外可见分光光度计,日本岛津有限
公司;Infinite M200pro 型酶标仪,Tecan 公司;Hera鄄
Cell 240i CO2 培养箱,Thermo Fisher Scientific 公司;
DMI3000B 型倒置荧光显微镜 , Leica 公司 ; ULT鄄
2586鄄4鄄V 型超低温冰箱,Thermo Scientific 公司。
1郾 3摇 方法
1郾 3郾 1摇 荔枝果肉多酚不同极性分部分离制备
荔枝果肉多酚提取物制备:新鲜荔枝去皮去核
后,将果肉浸泡在 95% 的乙醇溶液中( 料液比( 质量
与体积比)1颐 2,g / mL),转入冰水浴内切式匀浆机均
质 10 min,4 益 离心后收集上清液,果渣再重复提取
2 次 。 合并 3 次离心上清液, 用旋转蒸发仪 45 益 减
压回收乙醇 ,残留的水溶液为荔枝果肉多酚粗提液。
将粗提液经过 HPD鄄826 大孔树脂吸附后, 蒸馏水洗
脱除去可溶性糖和其他小分子化合物 ,再用 95% 乙
醇洗脱 ,收集乙醇洗脱液, 于 45 益 减压浓缩,得到深
黄色浓缩液 ,真空冷冻干燥后即为荔枝果肉多酚提
取物。
荔枝果肉多酚不同极性分部分离制备: 称取一
定量的荔枝果肉多酚提取物, 配制质量浓度为 20 g / L
的水溶液,按体积比为 1 颐 3 加入乙酸乙酯萃取, 摇
匀 ,静置,待溶液完全分层后,放出下层的水溶液,再
重萃取 4 次 。 将 5 次乙酸乙酯相合并,在 45 益 减压
浓缩回收乙酸乙酯, 将蒸干乙酸乙酯的提取物加少
量水溶解,冷冻干燥后称重备用。 剩余水溶液按上
述同样方法用水饱和正丁醇萃取 5 次 。 合并正丁醇
萃取液 ,45 益 减压浓缩至无有机溶剂残留, 旋蒸后
萃取物用少量蒸馏水溶解 , 冷冻干燥后称重备用。
剩余的水相同样在 45 益 减压浓缩除去有机试剂,冷
冻干燥后称重备用。
1郾 3郾 2摇 荔枝果肉多酚提取物及其不同极性分部的
总酚含量测定
总酚含量的测定采用 Folin鄄Ciocalteu 法[12] : 取
质量浓度为 1 g / L 不同的多酚萃取物 100 滋L,加入
Folin 酚 100 滋L, 反应 6 min, 再加入 1 mL 7% 的
Na 2 CO3 和 0郾 8 mL 水, 避光反应 90 min, 用紫外分光
光度计测定其在 760 nm 处的吸光度值,平行测定 3
次取平均值 。 以没食子酸溶液为标准品, 标准曲线
为 Y = 0郾 002X + 0郾 065,R 2 = 0郾 997,线性范围 0 ~ 500
滋g / mL, 其中 X 为没食子酸质量浓度 (滋g / mL), Y 为
吸光度 ,检测波长为 760 nm。 利用没食子酸标准曲
线的回归方程计算出不同极性分部中总酚含量 ,结
果以每 g 提取物 ( 或不同极性分部 ) 中所含的没食
子酸质量(mg / g) 表示。
1郾 3郾 3摇 荔枝果肉多酚提取物及其不同极性分部的
总黄酮含量测定
总黄酮含量的测定采用硝酸铝 - 亚硝酸钠比色
法 [12] :将不同极性分部荔枝果肉多酚提取物 0郾 3 mL
加到 10 mL 试管中, 再加入 1郾 5 mL 的蒸馏水,接着
加入 90 滋L 5% 的亚硝酸钠溶液,静置反应 5 min,再
加入 10% 的三氯化铝 180 滋L,静置 5 min, 最后加入
0郾 6 mL 浓度为 1 mol / L NaOH 溶液, 用蒸馏水将溶
液总体积补足到 3 mL,在 510 nm 下测其吸光度值 。
平行测定 3 次 ,取平均值。 以儿茶素为标准品, 标准
23 食品科学技术学报摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2016 年 5 月