食品科学技术21603 - page 27

1郾 2郾 4摇 总黄酮含量分析
参考 Dewanto 等[18 - 19] 的方法并稍作改进。 0郾 3
mL 稀释后的游离酚 / 结合酚提取物加入 1郾 5 mL 蒸
馏水和 0郾 09 mL 5 g / L 的亚硝酸钠溶液。 反应 6 min
后加入 0郾 18 mL 10 g / L 的 AlCl3·6H2 O 溶液,静置 5
min 后加入 0郾 6 mL 1 mol / L 的 NaOH 溶液, 最后用
蒸馏水补足至 3 mL, 在 510 nm 下测定其吸光值。 同
时以 0郾 3 mL 甲醇代替提取液作为空白对照, 配置不
同浓度梯度的儿茶素标准品制作标准曲线。 总黄酮
含量结果以每 100 g 鲜果肉中所含的儿茶素质量表
示,简写为 mg / 100 g。 测定重复 3 次。
1郾 2郾 5摇 DPPH 自由基清除能力测定
参考 Zhang 等 [20 - 21] 的方法并稍作改进。 200
滋L 提取物或甲醇溶液( 参比溶液) 加入 2郾 8 mL 70
滋mol / L 的 DPPH 甲醇溶液, 振荡均匀后于暗室中反
应 30 min, 于 515 nm 下测定其吸光值 。 样品的
DPPH抗氧化能力表示为抑制率 ( I ), 计算公式见
式(1)。
I = Ac - As
Ac 伊 100% 。 (1)
式(1) 中,Ac 为参比甲醇实测吸光值,其范围控制为
0郾 700 依 0郾 002, As 为样品实测吸光值。 同一样品稀
释为 6 个不同浓度, 分别测定其 DPPH 抗氧化能力,
得到线性回归曲线并计算该样品半效应浓度 EC50
值 ( EC50 表示 DPPH 自由基清除能力 I 为 50% 时所
需要的龙眼果肉酚类物质提取物的质量浓度, 单位
为 mg / mL)。 测定重复 3 次。
1郾 2郾 6摇 ABTS 自由基清除能力测定
采用 Miller 等[22] 的方法并略加调整。 7 mmol / L
的 ABTS + · 与 2郾 45 mmol / L 的过硫酸钾用去离子水
定容至 25 mL,混合液在暗室下反应 12 ~ 16 h,形成
ABTS + · 自由基储备液。 测定前, 将上述混合液与
无水乙醇按照体积比 1 颐 50 比例混合, 稀释为工作
液,在 734 nm 波长调吸光度为 0郾 700 依 0郾 020, 于 30
益 下保温备用。 准确移取 100 滋L 稀释后的提取液,
与 2 mL ABTS + · 混匀,在 30 益 暗室中反应 30 min,
于 734 nm 波长下测定其吸光度 。 以 Trolox( 水溶性
维生素 E) 代替样品制作标准曲线, 得到回归方程:
Y = - 0郾 005 4 X + 0郾 675 6( R2 = 0郾 999 9)。 ABTS 抗
氧化能力值以每 100 g 鲜果肉中所含的 Trolox 质量
(mg / 100 g ) 表示。 测定重复 3 次。
1郾 2郾 7摇 FRAP 抗氧化能力测定
参考 Foroogh 等[23] 的方法并略加修改。 工作液
的配制 :300 mmol·L - 1 的醋酸钠缓冲液 ( 称取 1郾 823
g 无水醋酸钠和 16 mL 的冰乙酸 ,定容至 1 L,pH 值
为 3郾 6),10 mmol / L 的 TPTZ( 称取 0郾 078 g TPTZ,溶
剂为 40 mmol / L 的盐酸溶液定容至 25 mL), 20
mmol / L 的 FeCl3·6H 2 O( 称取 0郾 135 2 g FeCl3·6H2 O
定容至 25 mL),按照体积比为 10颐 1颐 1 的比例混合;
使用前于 37 益 水浴中加热 10 min 备用,避光现配现
用 。 移取 200 滋L 龙眼酚类物质提取液, 加入 2郾 80
mL 工作液, 混匀后暗室反应 30 min,于 593 nm 波长
下测定吸光值 。 以甲醇代替提取液作空白对照,
Trolox 为标准品绘制标准曲线。 铁离子还原抗氧化
能力值 ( ferric reducing antioxidant power,FRAP) 以
每 100 g 鲜果肉中所含的 Trolox 质量 (mg / 100 g) 表
示 。 测定重复 3 次 。
1郾 2郾 8摇 ORAC 抗氧化活性测定
参照 Wolfe 等 [24] 的方法。 提取液用氮气吹干
后再用 75 mmol / L 磷酸缓冲液稀释至总酚含量在一
定范围内 , 标准品稀释或样品等的溶解均使用 75
mmol / L 磷酸钾缓冲液 ( pH = 7郾 4)。 首先向空白孔
中加入 20 滋L 磷酸缓冲液,其余孔中分别加入 20 滋L
不同浓度的 Trolox 标准溶液 (6郾 25,12郾 50,25郾 00,
50郾 00 滋mol / L)、样品溶液或 17郾 5 滋mol / L 的没食子
酸溶液 ,另设加入 40 滋L 磷酸盐缓冲液和 200 滋L 荧
光素钠工作液的 F 孔,各处理均设 3 个复孔。 将 96
孔板放入荧光酶标仪中 37 益 孵育 10 min; 除 F 孔
外 ,每孔加入 200 滋L 0郾 96 滋mol / L 荧光素钠溶液,37
益 孵育 20 min;除 F 孔外 ,每孔再加入 20 滋L ABAP
溶液(119 mmol / L, 临用前用缓冲液配制), 立即启
动荧光酶标仪,在 37 益 下以激发波长 485 nm, 发射
波长 538 nm 连续测定各孔的荧光强度监测荧光衰
退情况, 每 4郾 5 min 重复测定一次, 测定 35 个循环
值 。 将酚类提取液的自由基作用下荧光衰退曲线的
延缓部分面积 ( Net AUC) 带入 6郾 25,12郾 50,25郾 00
和 50郾 00 滋mol / L 标准抗氧化物质 Trolox 的 Net AUC
与 Trolox 浓度所做标准曲线, 得到各提取液的氧自
由基吸收能力 ( oxygen radical absorbance capacity,
ORAC) 值, 以每 100 g 样品中所含 Trolox 质量
(滋mol / 100 g) 表示,实验重复 3 次 。
1郾 3摇 统计分析
以 24 个不同龙眼品种果肉游离态和结合态酚
类物质含量 、黄酮类物质含量、DPPH 自由基清除能
力 、ABTS 清除活性、FRAP、ORAC 为变量标准化后 ,
采用系统聚类法进行聚类分析 ;各变量之间相关性
22 食品科学技术学报摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2016 年 5 月