粉质量与萃取液体积的比例
),
常温下
400 W
超声
提取
1郾 5 h,
然后
4 000 r / min
离心
5 min,
分离上清液
和沉淀
。
在沉淀中重新加入
渍
(
乙醇
) = 55%
溶液
,
重复一次
。
合并
2
次提取的上清液
,
旋转蒸发去除
乙醇
[7]
。
将沉淀在
50 益
条件下烘干
,
打碎成细粉
,
加入
渍
(
硫酸
) =10%
的甲醇溶液
,
按料液比
1颐 21 g / mL
(
即沉淀细粉质量与甲醇溶液体积的比例
),
在
74 益
水
浴中提取
22郾 5 h,
然后
4 000 r / min
离心
5 min,
分离上清
液和沉淀
,
上清液即为
NEPP
粗提液
[8]
。
1郾 3郾 2摇
蓝莓
NEPP
的纯化
1郾 3郾 2郾 1摇
浓缩
将萃取液用旋转蒸发仪浓缩到原体积的
1 / 4,
然后加
NaOH
中和至
pH
值为
7。
采用抽滤的方法
过滤掉粗提过程中产生的杂质
,
然后用小分子透析
袋将无机盐分子和小分子用流动的水充分透析
,
进
一步浓缩
。
1郾 3郾 2郾 2摇
树脂处理及装柱
1)
新树脂用无水乙醇浸泡
24 h,
充分溶胀
,
用无
水乙醇淋洗至洗出液无白色浑浊为止
,
再去离子水
洗至无醇
,
吸干树脂中的水分
[9]
。
2)
处理好的树脂采用湿法装柱
,
先用蒸馏水充
分洗净层析柱
,
将预处理后的大孔树脂置于大烧杯
中并放入真空抽滤装置中排出树脂中的气泡
。
先在
层析柱中加入蒸馏水
,
放开层析柱底端的活塞至蒸
馏水剩余高度约三分之一高度时关闭活塞
。
将大孔
树脂搅拌均匀在悬浮状态下灌入层析柱中
,
快速打
开层析柱下端活塞
,
同时继续向层析柱中加入大孔树
脂至需要的柱高
。
用
3
倍柱体积蒸馏水平衡大孔树脂
柱
,
使其顶端平整柱体均一且树脂高度不变
[10]
。
1郾 3郾 2郾 3摇
蓝莓
NEPP
静态吸附及解吸实验
将
NEPP
溶液稀释
2
倍后抽滤
,
测其浓度
。
将
已经处理好的大孔树脂真空抽滤
,
烘箱烘干
。
称取
干燥后的
AB鄄8、DA鄄201、ADS鄄17、HPD鄄826、HD鄄20、
HPD鄄750、HPD鄄100C
树脂各
2 g,
分别加入
5,5,5,6,
6,6,8 mL
上述稀释后的
NEPP
溶液置于恒温振荡器
上
25 益
振荡
24 h,
进行静态吸附
。
然后测其吸附后
剩余体积和多酚浓度
,
根据式
(1)
计算吸附率
。
E
= (
C
0
V
0
-
C
1
V
1
)
/ C
0
V
0
伊 100
%
。 (1)
式
(1)
中
,
E
为吸附率
,% ;
C
0
为多酚溶液起始
质量浓度
, mg / mL;
C
1
为吸附后多酚质量浓度
,
mg / mL;
V
0
为多酚溶液起始体积
,mL;
V
1
为吸附后多
酚体积
,mL。
将树脂用蒸馏水洗至流出液无色
,
用滤纸吸干
表面水分
,
加入等体积的
渍
(
甲醇
) = 80%
的水溶液
置于恒温振荡器上
25 益
振荡
24 h
进行解吸
,
测解析液
体积和解吸后多酚浓度
。
根据式
(2)
计算解吸率
。
D
=
C
2
V
2
/
(
C
0
-
C
1
)
V
1
伊 100
%
。
(2)
式
(2)
中
,
D
为解吸率
,% ;
C
2
为解吸液中多酚
质量浓度
,mg / mL;
V
2
为解吸液体积
,mL;
C
1
为吸附后多
酚质量浓度
,mg / mL;
V
1
为吸附后多酚体积
,mL。
1郾 3郾 2郾 4摇
蓝莓
NEPP
动态吸附实验
通过静态实验确定最佳树脂
,
然后进行动态纯
化
。
装柱完成后
,
样品以
1郾 67 mL / min
的流速吸附
,
吸附完成后
(
样品液完全充满整个柱子
)
用蒸馏水
平衡
0郾 5 h,
用
渍
(
甲醇
) = 80%
的水溶液以
5 mL / 3
min
的流速洗脱
,
用自动部分收集器每
3 min
收集一
管
,
测动态吸附曲线
。
1郾 3郾 3摇
蓝莓
NEPP
色谱条件
以纯化后的
NEPP
为原料进行高效液相色谱分
析
。
称取
10 mg
纯化的
NEPP
溶于
10 mL
的
渍
(
甲
醇
) = 80%
的水溶液
,
上样量
10 滋L,
流速
1 mL / min,
柱温
25 益。
流动相
A
为
渍
(
甲酸
) = 10%
的水溶液
,
流动相
B
为水
颐
乙腈
颐
甲酸
= 40颐 50颐 10。
洗脱条件
:
0 min,88%A + 12% B;26 min,70% A + 30% B;40 ~
43 min,0%A + 100% B;48 ~ 50 min,88%A + 12% B。
测定波长为
280 nm
和
520 nm,
吸附率解吸率实验采
用
SPSS19
软件对数据进行方差分析
,
并进行
Tukey
HSD
差异显著性分析
,
P
< 0郾 05
表示差异显著
。
2摇
结果与分析
2郾 1摇
蓝莓
NEPP
静态吸附率和解吸率
将蓝莓
NEPP
粗提液进行静态吸附
,
在
AB鄄8、
DA鄄201、ADS鄄17、 HPD鄄826、 HD鄄20、 HPD鄄750、 HPD鄄
100C
等
7
种树脂中选择最佳树脂
,
各树脂的吸附率
和解吸率如图
1。
由图
1
可以看出
,7
种树脂对蓝莓
NEPP
的吸附
率达到
65%
以上
,
其中
HP鄄20
和
HPD鄄100 C
的吸附
率较高
,
而解吸率相对比较低
,
集中在
20% ~ 25% ,
综合考虑吸附率和解吸率选择
HPD鄄100C
进行动态
吸附
。
2郾 2摇
蓝莓
NEPP
在
HPD鄄100C
树脂的动态吸附曲线
通过静态吸附实验选择
HPD鄄100C
进行动态纯
化
,
动态吸附曲线见图
2。
由图
2
可以看出
,
动态条件下
HPD鄄100C
树脂
上吸附的多酚物质极易洗脱
,
从第
4
管就有多酚溶
15
第
34
卷 第
1
期
摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
韩彩静等
:
蓝莓不可萃取多酚的纯化及组分分析
