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液中浸泡 24 h,用乙醇洗至留出液加水不浑浊,去离
子水浸泡,洗至无醇味后备用[10] 。
1郾 6郾 2摇 AB-8 型大孔树脂的静态吸附及解析
准确称取处理好的 AB -8 型树脂 ,按比例加入
已知浓度的苦荞籽粒粗黄酮溶液,室温下吸附 6 h,
每隔一定时间用分光光度法测定吸附后溶液中黄酮
含量。 吸附后溶液减压抽滤, 得吸附后树脂,加入一
定量 70% 乙醇溶液,室温解析 4 h,每隔一定时间测
定解吸溶液中的黄酮含量。 将解析液进行减压抽
滤,滤液经真空浓缩除去乙醇,冷冻干燥,得纯化后的
苦荞籽粒黄酮,按 1郾 3郾 2 的方法测定黄酮纯度。 吸附量
Q(mg / g) 和解析率(%)的计算公式如式(2):
Q = C 0 V0 - C tV t
W ; P = C p Vp
QW 伊 100% , (2)
式(2) 中, Q 为每克树脂的吸附量,mg / g; P 为树脂
的解析率,% ;C0 为初始溶液质量浓度,mg / mL; C t 为
吸附后溶液质量浓度,mg / mL;C p 为解析后溶液质量
浓度,mg / mL; Vp 为解析后溶液体积,mL; V0 为初始
溶液体积,mL;V t为吸附后溶液体积,mL; W 为湿树
脂质量,g。
1郾 7摇 苦荞籽粒黄酮抗氧化性的测定
1郾 7郾 1摇 测定清除 O -
2 ·自由基能力[11]
采用邻苯三酚自氧化测定:取 pH 8郾 2,0郾 05 mol / L
的 Tris鄄HCl 缓冲液 4郾 5 mL, 去离子水 4郾 2 mL,25 益
保温 20 min,立即加入 0郾 3 mL 以 10 mmol / L HCl 配
制的邻苯三酚溶液,快速混匀,倒入比色皿,每隔 30 s
测其 320 nm 处的吸光度,HCl 溶液代替邻苯三酚作为
参比,计算线性范围内每分钟吸光度的增加值 驻A0 。
苦荞籽粒黄酮活性测定: 先分别加入 1郾 0 mL 各
梯度质量浓度的黄酮溶液和 3郾 2 mL 蒸馏水, 再加邻
苯三酚并进行后续操作, 计算线性范围内每分钟吸
光度的增加值 驻A1 。 抗坏血酸作阳性对照。
清除率 = 驻A0 - 驻A1
驻A0 伊 100% 。 (3)
1郾 7郾 2摇 测定抗脂质过氧化能力[12]
将 1 mL 10 mg / mL 大豆卵磷脂溶液、1 mL 0郾 4
mmol / L 的硫酸亚铁溶液 及 1 mL 样品依次加入到
10 mL 离心管。 避光 37 益 水浴 60 min, 加入 TCA鄄
TBA鄄HCl 混合液 2 mL,95 益 水浴 15 min,冷水冷却,
4 000 r / min 的转速离心 10 min, 测上清液在 535 nm
处吸光度 Ap ,1 mL 去离子水代替卵磷脂作参比。 空
白管以 1 mL 去离子水代替样品, 测其吸光度 Aq 。
抗坏血酸作阳性对照。
抑制率 = Aq - Ap
Aq 伊 100 % 。 (4)
1郾 7郾 3摇 测定还原力 [11]
向比色管中依次加入 pH 6郾 6 的 PBS 2郾 5 mL、质
量分数为 l% 的 K3 Fe(CN) 6 溶液 2郾 5 mL 和不同质量
浓度的样品溶液 2郾 5 mL,混匀,50 益 水浴 20 min,快速
冷却,加入质量分数为 10% TCA 溶液 2郾 5 mL,4 000
r / min 离心 10 min。 取 5郾 0 mL 上清液,加入蒸馏水 4郾 0
mL 和质量分数为 0郾 1% 的 FeCl 3 溶液 1郾 0 mL, 充分混
匀,静置 10 min 后,700 nm 波长处测吸光度。 抗坏血酸
做阳性对照,吸光度越大则还原力越强。
1郾 7郾 4摇 测定清除 DPPH 自由基的能力[ 13]
取 2 mL 2 伊 10 - 4 mol / L DPPH 的乙醇溶液 2 mL
及不同质量浓度样品溶液 2 mL,依次加入比色管
中 ,混匀,室温放置 30 min,以无水乙醇作参比, 测其
在 517 nm 波长下的吸光度。 相同方法测定 2 mL 无
水乙醇与 2 mL DPPH 溶液混合后的吸光度 A1 , 以及
2 mL 样品液与 2 mL 无水乙醇混合后的吸光度 A2 ,
抗坏血酸做阳性对照 ,计算样品对 DPPH 的抑制率:
抑制率 = A1 - ( A0 - A2 )
A1 伊 100% 。 (5)
2摇 结果与分析
2郾 1摇 单因素实验结果
2郾 1郾 1摇 液料比对苦荞籽粒总黄酮提取率的影响
液料比和黄酮提取率的关系如图 1。 由图 1 可
知 ,随着液料比的增加,苦荞总黄酮提取率也逐渐增
大 。 当液料比为 15 颐 1 (mL / g) 时 , 苦荞黄酮提取率
达到峰值,超过该比例后, 黄酮提取率略有所下降后
趋于稳定,故选择液料比为 15颐 1。
图 1摇 不同液料比对黄酮提取率的影响
Fig. 1摇 Effect of liquid鄄to鄄solid ratio on flavonoid yield
2郾 1郾 2摇 乙醇体积分数对苦荞总黄酮提取率的影响
乙醇体积分数和黄酮提取率的关系如图 2。 随
着乙醇体积分数的增加, 苦荞总黄酮提取率显著增
大 ,当乙醇体积分数为 70% 时黄酮提取率达到峰
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第 33 卷 第 6 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 李摇 飞等: 苦荞籽粒黄酮的提取纯化及抗氧化活性研究