201506 - page 63

迪生物技术有限公司。
DPPH 为进口分装试剂, 三氯乙酸 (TCA)、硫代
巴比妥酸(TBA)、硫酸亚铁、铁氰化钾、 邻苯三酚、磷
酸盐缓冲液( PBS) 、Tris鄄HCl、 三氯化铁、 水杨酸等
均为国产分析纯。
1郾 2摇 仪器与设备
FW-100 型高速万能粉碎机, 北京中兴伟业仪
器有限公司;DSHZ -300A 型水浴恒温振荡器, 太仓
市实验设备厂;SHB-芋 型循环水式多用真空泵, 郑
州长城科工贸有限公司;T6 型新世纪紫外可见分光
光度计, 北京普析通用仪器有限责任公司 ; RE -
52AA 型旋转蒸发器, 上海亚荣生化仪器厂;DK-S22
型电热恒温水浴锅,上海精宏实验设备有限公司;TDL
-5-A 型离心机,上海安亭科学仪器厂。
1郾 3摇 方法
1郾 3郾 1摇 苦荞黄酮的提取[ 7]
将苦荞籽粒清洗,50 益 烘箱干燥 24 h, 粉碎, 过
100 目筛,60 ~ 90 益 石油醚于恒温水浴摇床中 60 益
脱脂 9 h,减压抽滤,干燥,得脱脂苦荞粉。 准确称取
4郾 00 g 脱脂苦荞粉,加入不同浓度的乙醇溶液,于恒温
水浴摇床中提取一定时间, 提取液减压抽滤后得苦荞
黄酮样品液。 样品液经真空浓缩、冷冻干燥得到苦荞
黄酮粗提物。 将苦荞黄酮粗提物以一定浓度复溶于去
离子水中,大孔树脂吸附纯化得苦荞总黄酮。
1郾 3郾 2摇 黄酮含量的测定
将黄酮样品液用体积分数 70% 乙醇溶液定容
至一定体积,混匀, 以芦丁为对照品, 采用 NaNO2 鄄Al
(NO3 ) 3 鄄NaOH 分光光度法[8] 测定样品液中的黄酮
含量。
1郾 3郾 3摇 芦丁标准溶液的配制和标准曲线的制作
1郾 3郾 3郾 1摇 标准溶液的配制
将芦丁标准品于 120 益 烘箱中烘至恒重, 于干
燥器中冷却, 精密称取 0郾 030 g 冷却后的芦丁标准
品,用体积分数 70% 的乙醇溶解 ,定容至 100 mL, 得
质量浓度为 0郾 300 mg / mL 芦丁标准液 。
1郾 3郾 3郾 2摇 标准曲线的制备 [9]
分别准确吸取芦丁标准液 0, 1郾 0, 2郾 0, 3郾 0,
4郾 0,5郾 0,6郾 0 mL 于 25 mL 比色管中,用 70% 乙醇定
容至 12郾 5 mL, 加入质量分数为 5% 的 NaNO2 溶液
0郾 7 mL,混匀,静置 5 min 后加入质量分数为 10% 的
Al(NO3 ) 3 溶液 0郾 7 mL,静置 6 分钟后加入浓度为 1
mol / L 的 NaOH 溶液 5 mL,70% 乙醇定容至 25 mL,
混匀,静置 10 min 后用 1 cm 比色皿于 510 nm 波长
处测定吸光度,同时用 70% 乙醇溶液代替芦丁标准
液作为参比 , 以所测得的吸光度 A 为横坐标, 芦丁
质量浓度 Y(mg / mL) 为纵坐标绘制标准曲线。 求得
芦丁质量浓度 Y 与吸光度 A 的回归方程: Y =
2郾 005A + 0郾 007 2, 方程 R2 为 0郾 999 6,说明该方程在
0 ~ 1郾 8 mg / mL 呈良好的线性关系。
1郾 3郾 4摇 总黄酮含量的测定
准确吸取 1郾 0 mL 稀释一定倍数的苦荞黄酮粗
样品液于 25 mL 比色管中 , 按照 1郾 3郾 3郾 2 节方法测
定吸光度,根据回归方程得出苦荞黄酮的质量浓度 ,
计算出苦荞中总黄酮的提取率, 见式(1)。
总黄酮提取率 = cVN
m 伊 1 000 伊 100% , (1)
式 (1) 中 ,c 为计算得出的黄酮质量浓度,mg / mL; V
为定容的体积,mL;N 为样品稀释倍数; m 为脱脂苦
荞粉的质量 ,g。
1郾 4摇 单因素实验
液料比的确定:取脱脂苦荞粉 4郾 00 g,按液料比
(mL / g) 分别为 5颐 1,10颐 1,15颐 1,20颐 1,25颐 1 加入体积
分数为 70% 的乙醇, 于水浴恒温振荡器中 70 益 提
取 4 h,减压抽滤,测浸提液中黄酮含量。
乙醇浓度的确定 :取脱脂苦荞粉 4郾 00 g,按液料
比 15 颐 1 分别加入体积分数为 50% ,60% ,70% ,
80% ,90% 的乙醇, 于水浴恒温振荡器中 70 益 提取
4 h,减压抽滤,测浸提液中黄酮含量。
提取温度的确定 :取脱脂苦荞粉 4郾 00 g,按液料
比 15颐 1分别加入体积分数为 70% 的乙醇于水浴恒
温振荡器中分别在 50,60,70,80 益 条件下提取 4 h,
减压抽滤,测浸提液中黄酮含量 。
提取时间的确定 :取脱脂苦荞粉 4郾 00 g,按液料
比 15颐 1分别加入体积分数为 70% 的乙醇于水浴恒
温振荡器中,70 益 分别提取 2,3,4,5,6 h, 减压抽
滤 ,测浸提液中黄酮含量。
1郾 5摇 苦荞籽粒黄酮提取响应面法优化分析
本试验采用 Design鄄Expert 8郾 0郾 6 软件中的 Box鄄
Behnken 中心组合试验设计原理设计响应面实验。
实验选取液料比、 乙醇浓度、 提取温度 、 提取时间 4
个对苦荞黄酮提取率影响较大的因素, 根据单因素
实验结果对提取工艺进行四因素三水平的响应面试
验设计与分析。
1郾 6摇 AB鄄8 型树脂纯化工艺
1郾 6郾 1摇 树脂的预处理
将大孔树脂于一定量体积分数为 95% 乙醇溶
85 食品科学技术学报摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2015 年 11 月