酶两步法
冶
提取米渣中的蛋白质
,
效果较好
。
排杂
法提取则是尽量把各种非蛋白成分除去
,
最终获得
高纯度的米渣蛋白
。
然后通过冷冻干燥得到产品
,
其色泽和品质都有很大的提高
,
基本达到食品级蛋
白质的要求
。
但是
,
由于纤维素酶和淀粉酶的使用
使提取成本有所提高
。
本文将碱法和酶法结合起来
,
采用碱溶酶解两
步提取法
,
既提高了蛋白质提取率又避免了由于碱
液浓度过高引起的蛋白质变性
。
1摇
材料与方法
1郾 1摇
材料与试剂
米渣由武汉市佳宝糖业有限公司提供
;
鄂中
5
号大米购于武汉市场
。
食用级碱性蛋白酶购于南宁庞博生物工程有限
公司
,
酶活力为
1郾 0 伊 10
5
U / g。
盐酸
,
乙酸锌
,
亚铁
氰化钾
,
酒石酸铜
,
酪蛋白
,
硫酸铜
,
亚甲蓝
,
氢氧化
钠
,
葡萄糖
,
蒽酮
,
无水乙醚
,
硫酸钾
,
硫酸
,
硼酸
,
无
水乙醇均为分析纯
。
1郾 2摇
仪器与设备
FA1104
型分析天平
,
上海精科天平有限公司
;
DHG-9075A
型恒温鼓风干燥箱
,
上海一恒科学仪
器有限公司
;4-10
型马福炉
,
上海仪器公司
;FW80
型万能粉碎机
,
天津市泰斯特仪器有限公司
;
索氏抽
提器
,
蜀牛实验仪器有限公司
;WFJ 7200
型紫外可
见光分光光度计
,
龙尼柯
(
上海
)
仪器有限公司
;SHA
-B
型双功能水浴恒温振荡器
,
常州国华电器有限
公司
;TDL -5-A
型低速台式大容量离心机
,
上海安
亭科学仪器厂
;DLL -1
型电子万用炉
,
浙江上虞市
通州实验仪器厂
。
1郾 3摇
方法
1郾 3郾 1摇
原料预处理
将米渣和对照米样
(
鄂中
5
号大米
)
粉碎
,
过
40
目筛
,
得米渣粗粉
,
封装
,
备用
。
1郾 3郾 2摇
米渣营养成分分析
水分含量的测定采用直接干燥法
[8]
。
灰分的
测定采用
GB 5009郾 4
方法
[9]
。
蛋白质的测定采用
半微量凯氏定氮法
[10]
。
脂肪的测定采用索氏抽提
法
[11]
。
淀粉的测定采用酶水解法
[12]
。
1郾 3郾 3摇
米渣蛋白质提取
1郾 3郾 3郾 1摇
米渣蛋白质等电点测定
称取一定质量米渣粗粉
,
按碱溶固液比
1颐 12 g / mL
(
即米渣粗粉质量与碱液体积的比例
)
加碱液
,
搅拌
均匀
,
制成匀浆
。
调节其
pH
值为
12郾 0,
在
50 益
的
水浴中缓慢搅拌
2 h,
离心
(10 000 r / min,15 min),
取
上清液
,
即得到米渣蛋白粗提液
。
将其
pH
值调节
为
2郾 5,3郾 0,3郾 5,4郾 0,4郾 5,5郾 0
以及
5郾 5,
静置
2 h,
离
心
(10 000 r / min,15 min),
弃上清
,105 益
烘干至恒
重
,
计算
m
(
蛋白质
),
m
(
蛋白质
)
最大的
pH
值为米
渣蛋白质的等电点
。
1郾 3郾 3郾 2摇
米渣蛋白质提取工艺流程
碱溶工艺是称取一定质量的米渣粗粉
,
按一定
固液比
(
即米渣粗粉质量与碱液体积的比例
,g / mL)
加碱液
,
搅拌均匀
,
制成匀浆
,
调节其
pH
值
,
在
50
益
的水浴中缓慢搅拌
2 h,
于
10 000 r / min
离心
15
min,
取上清
,
即得到米渣蛋白粗提液
。
调节其
pH
值至米渣蛋白质等电点
,
静置
2 h,
于
10 000 r / min
离心
15 min,
取沉淀
,
干燥
,
即得米渣粗蛋白质
。
酶解工艺是取上述米渣粗蛋白质
,
按一定固液
比
(
即米渣粗蛋白质量与碱液体积的比例
,g / mL)
加
碱液
,
搅拌均匀
,
调节其
pH
值
,
加入一定浓度的碱
性蛋白酶
,
在
40 益
恒温水浴锅中慢速搅拌
2 h,
于
10 000 r / min
离心
15 min,
取上清
,
调节
pH
值至等电
点
,
静置
2 h,
于
10 000 r / min
离心
15 min,
取沉淀
,
干
燥
,
即得米渣蛋白质
。
1郾 3郾 4摇
蛋白质测定及提取率计算
提取液中蛋白质含量采用双缩脲法测定
[13]
,
原
料中蛋白质含量采用半微量凯氏定氮法测定
[10]
,
蛋白质换算系数取
6郾 25,
蛋白质提取率按式
(1)
计算
。
蛋白质提取率
=
提取液中蛋白质的质量
原料中蛋白质的质量
伊 100% 。
(1)
1郾 3郾 5摇
碱溶工艺优化
各取
1郾 3郾 1
节中制得的米渣粗粉
5郾 0 g,
按照
1郾 3郾 3郾 2
节中的碱溶步骤提取蛋白质
,
以蛋白质提
取率为指标
,
考察碱溶固液比和碱溶
pH
值对蛋白
质提取率的影响以确定提取条件
,
每组做
3
个平行
。
1郾 3郾 5郾 1摇
碱溶固液比对蛋白质提取率的影响
在碱溶
pH
值为
10郾 0、
温度
50 益
以及提取时间
2 h
的条件下
,
考察碱溶固液比
1颐 6,1颐 8,1颐 10,1颐 12
以及
1颐 14 g / mL
对米渣蛋白提取率的影响
。
1郾 3郾 5郾 2摇
碱溶
pH
值对蛋白质提取率的影响
在碱溶固液比为
1颐 12 g / mL、
温度
50 益
以及提
取时间
2 h
的条件下
,
考察碱溶
pH
值
11郾 5,12郾 0,
66
食品科学技术学报
摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
摇 2015
年
11
月
