45 - 食品科学技术学报页

4 mL 邻苯二甲醛显色剂, 漩涡振荡 1 min 后静置 10
min,加入 2 mL 硫酸漩涡振荡 1 min, 避光静置 10
min 后 ,用分光光度计在波长 550 nm 处测吸光度,
根据胆固醇与吸光度标准曲线方程计算胆固醇的质
量浓度.
1郾 3摇 标准曲线绘制
在干燥洁净的 5 支试管中分别加入 5 mL 含胆
盐质量浓度为 1郾 0 mg / mL 的 MRS鄄THIO 培养基, 分
别再加入 0郾 05,0郾 10,0郾 15,0郾 2,0郾 25 mL 的胆固醇
母液使胆固醇质量浓度为 20,40,60,80,100 mg / L,
依照测定胆固醇的方法测定其吸光度, 横坐标为胆
固醇质量浓度,纵坐标为吸光度绘制曲线, 可得到曲
线回归方程, 计算胆固醇的质量浓度. 胆固醇的去
除率按式(1) 计算 [7] .
胆固醇去除率 / % = (1 - 籽1 / 籽0 ) 伊 100, (1)
式(1) 中, 籽1 为培养后菌液中上清液中的胆固醇质量
浓度;籽0 为初始培养基中总胆固醇的质量浓度.
1郾 4摇 胆盐质量浓度对乳酸菌降胆固醇能力的研究
分别加入 5 mL 含有 170 mg / L 胆固醇 (5 mL
MRS鄄THIO 培养基加入 425 滋L 母液 ) 的 MRS鄄THIO
培养基于 6 支干燥洁净的试管, 添加胆盐分别至质
量浓度为 0,2,4,6,8,10 mg / mL,接种量按体积比的
3% 的量接种, 接种后将含乳酸菌的培养基于 37 益
恒温箱中培养 24 h,取 0郾 5 mL 培养后的乳酸菌上清液
按胆固醇测定方法测定其剩余的胆固醇质量浓度. 以
不含乳酸菌的高胆固醇培养基作为空白对照.
1郾 5摇 胆固醇质量浓度降胆固醇能力的研究
分别加胆盐质量浓度为 1郾 0 mg / mL 的 MRS鄄
THIO 培养基 5 mL 于 6 支干燥洁净的试管,再分别
加入胆固醇母液 75,175,275,375,475,575 滋L 至胆
固醇质量浓度为 30,70,110,150,190,230 mg / L,接种量
按体积比的 3% 的量接种,接种后将含乳酸菌的培养基
于 37 益 恒温箱中培养 24 h,取 0郾 5 mL 培养后的乳酸菌
上清液按胆固醇测定方法测定其剩余的胆固醇质量浓
度. 以不含乳酸菌的高胆固醇培养基作为空白对照.
1郾 6摇 培养时间对乳酸菌降胆固醇能力的研究
取 7 支干燥洁净的试管, 分别加含有 170 mg / L
胆固醇的胆盐质量浓度为 1郾 0 mg / mL 的 MRS鄄THIO
培养基 5 mL,每种菌按 3% 的接种量接种, 接种后将
含乳酸菌的培养基于 37 益 恒温箱中分别培养 3,7,
11,15,19,23,36 h. 取 0郾 5 mL 培养后的乳酸菌上清
液按胆固醇测定方法测定其剩余的胆固醇质量浓度.
以不含乳酸菌的高胆固醇培养基作为空白对照.
另取 36 支试管各加入 1 mL 胆盐质量浓度为
1郾 0 mg / L 的 MRS鄄THIO 培养基再分为 3 组, 按 3%
接种 接种后将含乳酸菌的培养基于 恒温箱中
分别培养 2,4,6,8,10,12,14,16,18,20,22,24 h, 取
0郾 5 mL 培养后的乳酸菌上清液加入 5 mL 蒸馏水稀
释 ,再用分光光度计在 600 nm 波长处测定光密度
值 ,以不含乳酸菌的高胆固醇培养基作为空白对照 ,
绘制生长曲线.
1郾 7摇 培养基初始 pH 值降胆固醇能力的研究
分别加含有 170 mg / L 胆固醇的胆盐质量浓度
为 1郾 0 mg / mL 的 MRS鄄THIO 培养基 5 mL 于 6 支干
燥洁净的试管 ,分别将 pH 值调节为 3郾 0,4郾 0,5郾 0,
6郾 0,7郾 0,8郾 0,按 3% 接种 , 接种后将含乳酸菌的培
养基于 37 益 恒温箱中培养 24 h,取 0郾 5 mL 培养后的乳
酸菌上清液按胆固醇测定方法测定其剩余的胆固醇质
量浓度,空白对照为不含乳酸菌的高胆固醇培养基.
2摇 结果与分析
2郾 1摇 标准曲线分析
在牛胆盐质量浓度为 1郾 0 mg / mL 的 MRS鄄THIO
培养基中添加质量浓度不同的胆固醇, 按照测定胆
固醇方法测定吸光度, 以吸光度 ( A550 nm ) 为纵坐标,
横坐标为胆固醇质量浓度 (mg / L),绘制标准曲线 ,
见图 1.
图 1摇 标准曲线
Fig. 1摇 Standard curve
摇
2郾 2摇 胆盐质量浓度对乳酸菌降胆固醇能力的影响
胆盐质量浓度对乳酸菌降胆固醇能力的影响结
果见图 2. 由图 2 可知, 胆盐浓度对 6 种乳酸菌均有
显著性影响 ,粪肠球菌 、 德氏乳杆菌、 嗜酸乳杆菌随
着胆盐质量浓度的增加, 对胆固醇的降解能力均先
下降后有所增加 , 在胆盐质量浓度为 4 ~ 6 mg / mL
时 , 对胆固醇的去除能力达到最大值, 分别为
23郾 1% ,33郾 8% ,38郾 2% . 当胆固醇质量浓度再增加
时,这四种乳酸菌对胆固醇的降解能力反而有所下降.
发酵乳杆菌和鼠李糖乳杆菌在不加胆盐时对胆固醇的
去除能力最强,去除率分别为 32郾 6%,31郾 0%, 当加入
胆盐时,去除率均显著降低( P <0郾 05).
24 食品科学技术学报 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2014 年 9 月