1郾 3郾 3郾 6摇
温度对糖原和蛋白质分离效果的影响
实验
取一定量的牡蛎匀浆液
,
将其与
0郾 30 mol / L
的
乙酸溶液分别按照料
( g)
液
(mL)
比
1颐 1
比例混合
,
用
4 mol / L
的氢氧化钠溶液或
4 mol / L
的盐酸溶液
将
pH
值调至
6郾 5,
分别于
15,30,45,60,75,90 益
下
用磁力搅拌器搅拌反应
0郾 5 h
后离心分离
。
1郾 3郾 4摇
正交试验
为确定牡蛎匀浆中糖原和蛋白质最佳分离条
件
,
寻找各因素之间的主次关系
,
根据单因素实验结
果设计
4
因素
3
水平正交试验
,
以上清液中糖原
、
蛋
白质保留率及糖原
、
蛋白质浓度之比为考察指标
,
确
定乙酸分离糖原和蛋白质的优化条件
。
因素水平见
表
1。
表
1摇
正交试验因素水平
Tab. 1摇 Factors and levels of orthogonal test
水平
因素
pH
值
t
/ 益
c
/ (mol·L
-1
)
料
(g)颐
液
(mL)
1
6郾 0
60
0郾 2
1颐 1
2
6郾 5
75
0郾 3
1颐 3
3
7郾 0
90
0郾 5
1颐 5
1郾 3郾 5摇
分析方法
水分的测定采用干燥法
[11]
,
灰分的测定采用灼
烧法
[11]
,
粗蛋白的测定采用凯氏定氮法
[11]
,
总糖的
测定采用苯酚硫酸法
[12]
。
矿物质及重金属元素的测定
:
样品加硝酸浸泡
过夜后加入过氧化氢
,
用高压消解罐消化
(130 益
保
温
4 h)
后定容测定
;
铅
、
镉
、
铬采用石墨炉原子吸收
法测定
;
钙
、
镁
、
锌
、
铁
、
铜采用火焰原子吸收法测定
。
2摇
结果与分析
2郾 1摇
单因素实验结果分析
2郾 1郾 1 摇
有机酸种类对糖原和蛋白质分离效果的
影响
采用不同有机酸处理牡蛎匀浆液后
,
离心分离
上清液中的总糖和粗蛋白
,
计算保留率
,
得图
2,
总
糖与粗蛋白的质量比分析结果见图
3。
由图
2
和图
3
可知
,
加入
4
种有机酸都能很好
地沉淀牡蛎匀浆中的蛋白质
,
但对糖原的沉淀作
用不强
,
因此有望实现糖原与蛋白质的分离
。 4
种
酸及水对牡蛎中蛋白质的沉淀作用差异不大
,
但
对糖原的沉淀作用差异较大
。
实验中选用的
4
种
不同字母间差异显著
(
p
< 0郾 05)
图
2摇
有机酸种类对上清液中总糖和粗蛋白保留率的影响
Fig. 2摇 Effects of kinds of organic acids on retention rates of
total sugar and crude protein in supernatant
不同字母间差异显著
(
p
< 0郾 05)
图
3摇
有机酸种类对上清液中总糖与粗蛋白质量比的影响
Fig. 3摇 Effects of kinds of organic acids on ratio of total sugar
concentration and crude protein concentration in su鄄
pernatant
有机酸中
,
乙酸对糖原的沉淀作用最小
,
分离效果
最好
,69郾 62%
的蛋白质发生了沉淀
,
但有
70郾 25%
的糖原保留在上清液中
,
上清液中的糖原与蛋白
质的浓度比达到
0郾 97,
沉淀中蛋白质与糖原的浓
度之比达到
12郾 44。
乙酸溶液能有效地分离牡蛎
匀浆中的糖原和蛋白质
,
为此本实验均采用乙酸
作为沉淀分离剂
。
2郾 1郾 2摇
pH
值对糖原和蛋白质分离效果的影响
pH
值会影响蛋白质的带电状况
,
从而影响蛋白
质在水溶液中的溶解性
。
郑惠娜等
[13]
在实验中确
定牡蛎蛋白最佳酸沉
pH
值为
4郾 5 ~ 5郾 1,
故选取
pH
值为
3郾 0,4郾 0,5郾 0,5郾 5,6郾 0,6郾 5,7郾 0
进行实验
。
不
同
pH
值处理后离心上清液中的总糖和粗蛋白的保
留率见图
4,
总糖与粗蛋白质量比分析结果见图
5。
由图 和图 可知 随着 值的上升 上清液
55
第
34
卷 第
3
期
摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
谢昕蛰等
:
有机酸沉淀法分离牡蛎中的糖原和蛋白质
