40 - 食品科学技术学报页

物科技股份有限公司; D -37520 型离心机,Sigma
laborzentrifugen 公司;TD5A 型离心机, 湖南赫西仪
器装备有限公司; SpectraMAX190 型酶标仪,Molec鄄
ular Devices; FW400A 型万能粉碎机, 北京中兴伟业
有限公司;HH-4 型水浴锅, 华港通国际有限公司;
Eppendorf 96 孔板,Eppendorf 中国有限公司.
1郾 3摇 实验方法
1郾 3郾 1摇 提取黄酮类化合物
参考文献[9],提取苦荞麦粉中黄酮类化合物.
将过 40 目筛的苦荞麦粉 , 放入烘箱中, 温度恒定为
60 益, 烘干,待物料恒重后取出, 密封袋包装好, 称
重, 备用. 准确称取 5郾 00 g 苦荞麦粉于 200 mL 溶剂
中, 首先静置约 10 min,目的是为了让苦荞麦粉在微
波前更好的浸透于溶剂中,从而提高微波提取效率.
后进行微波辅助提取, 提取结束后进行离心 5 000
r / min,15 min, 后取上清液, 加入硫酸铵, 静置 , 分
相. 上层液体为乙醇相. 将两相分离, 将上层液体
进行离心,5 000 r / min,5 min, 取上清液,妥善保存,
待测. 最后测上清液黄酮含量,取上清液 2 mL 于 10
mL 容量瓶, 定容, 摇匀,用 96 孔板测其吸光度, 并对
照芦丁标准曲线计算黄酮类化合物含量及其提取
率, 每次实验重复 3 次.
1郾 3郾 2摇 总黄酮含量测定
准确称取 0郾 10 g 芦丁 ,置 500 mL 烧杯中 ,加入
乙醇溶解,后转移置 500 mL 容量瓶中, 定容,制得质
量浓度为 0郾 2 mg / mL 的芦丁对照品溶液. 用移液管
准确量取芦丁标准品溶液 0郾 0,0郾 5,1郾 0,1郾 5,2郾 0,
2郾 5,3郾 0 mL 分别置于 10 mL 容量瓶中, 分别加乙醇
溶液至 3郾 0 mL, 加 棕(NaNO2 ) 为 5% 的水溶液 0郾 3
mL,摇匀, 放置 6 min,加 棕(Al(NO) 3 ) 为 10% 的水
溶液 0郾 3 mL, 摇匀, 放置 6 min, 最后加入 1 mol / L
NaOH 溶液 4 mL,再加入 准( 乙醇 )30% 的溶液定容
至刻度线,摇匀,放置 15 min, 在 510 nm 波长处测定
吸光度. 以吸光度为纵坐标; 芦丁标准品的质量浓
度为横坐标,mg / L,绘制标准曲线,见图 1.
图 1摇 芦丁标准曲线
Fig. 1摇 Standard curve of rutin
计算回归方程为 y = 0郾 004 2 x - 0郾 002 9 ( R2 =
0郾 998 7), 确定了 0 ~ 60 mg / L 芦丁吸光度与质量浓
度的线性关系.
1郾 3郾 3摇 双水相体系的确定及单因素实验
确定苦荞麦粉中黄酮类化合物提取的较优乙醇
体积分数以及硫酸铵添加量 . 以微波提取时间 、 微
波提取功率 、料液比为因素进行单因素实验, 考察各
个因素分别对苦荞麦粉黄酮得率的影响 .
1郾 3郾 4摇 Box鄄Behnken 试验设计与数据处理
在单因素实验基础上, 采用 Box鄄Behnken 试验
设计方法, 确定自变量,以苦荞麦粉总黄酮得率为响
应值, 采用响应面分析法安排实验以获取较佳提取
条件, 并用 Design鄄Expert 7 软件进行数据分析.
2摇 结果与讨论
2郾 1摇 苦荞麦粉黄酮类化合物提取的较优乙醇体积
分数以及硫酸铵添加量
2郾 1郾 1摇 乙醇体积分数的确定
通过预实验研究表明乙醇 - 硫酸铵双水相在乙
醇体积分数为 18% ~ 55% 范围内, 添加适量硫酸铵
时乙醇 - 硫酸铵可以分成两相. 本实验在此基础上
进行乙醇- 硫酸铵较优配比的探究. 在分成两相的
乙醇体积分数区间取整数体积比以方便实验研究 ,
因此乙醇体积分数范围为 20% ~ 50% ,取体积分数
20% ,30% ,40% ,50% , 硫酸铵以 0郾 1 g / mL 作为最
小单位分组 , 共分为 6 组,0郾 2 ~ 0郾 7 g / mL. 根据上
述条件进行实验 ,所得双水相上层液体体积与乙醇
的体积分数和硫酸铵添加量关系如表 1.
表 1摇 乙醇体积分数和硫酸铵添加量对双水相上层
液体体积的影响
Tab. 1摇 Effect of ammonium sulfate dosage and alcohol concen鄄
tration on top phase volume of aqueous two鄄phase
硫酸铵添加量 /
(g·mL -1 )
准( 乙醇) / %
20 30 40 50
0郾 2 不分相 65 72 76
0郾 3 2 40 68 71
0郾 4 6 28 60 76
0郾 5 13 37 68 79
0郾 6 13 35 68 75
0郾 7 11 33 73 75
摇 摇 从表 1 可得, 乙醇体积分数为 30% 时, 硫酸铵
添加量为 0郾 3 ~ 0郾 5 g / mL 时, 上层液体体积近似于
溶液中的乙醇体积, 列入以下实验考虑中,而硫酸铵
的添加量需进一步实验确定. 乙醇体积分数在 40%
和 50% 时 ,恰恰与 20% 乙醇双水相呈现相反现象,
综合考察双水相系线原则、萃取时操作方便、萃取率等
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第 32 卷 第 6 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 徐春明等: 微波辅助双水相提取苦荞麦粉中黄酮类化合物