食品科学技术学报201504 - page 24

由基的量低于 ESR 检测限 ,因此没有被体现出来。
当 ana鄄rLOX 在 pH 值 8 缓冲体系中时,能明显检测
到自由基信号;当 ana鄄rLOX 在 pH 值 9 缓冲体系中
时, 自由基信号非常强; 这一趋势与用分光光度法检
测的 ana鄄rLOX 的酶活变化趋势相一致 , 因此,ana鄄
rLOX 的最适反应 pH 值为 9 。
2郾 3摇 不同缓冲体系中 ana鄄rLOX 的熔解分析
在一定条件下, 蛋白质的稳定性可以用蛋白质
熔解的方法来测定, 蛋白质的稳定性与蛋白质的熔
解温度 Tm 值相关。 改变蛋白质的测试条件, 其 Tm
值将会随之改变, 从而反映出蛋白质稳定性的变化;
蛋白质的熔解温度 Tm 值越高说明蛋白质的稳定性
越好。 图 4 显示了 ana鄄rLOX 在不同缓冲液体系中
的熔解曲线和熔解温度, 可以观察到随着 pH 值的
升高, ana鄄rLOX 的熔解温度呈先上升后下降的趋
势。 当 pH 值为 7 时,熔解温度最高 ,为 58 益,说明
在 pH 值 为 7 时 ,ana鄄rLOX 的稳定性最好。 这个结
果与用分光光度法测得的 ana鄄rLOX 的 pH 值稳定
性结果一致 。 那么 , 在不同 pH 值条件下 ana鄄rLOX
的结果究竟发生了如何变化, 从而影响了酶的活性
和稳定性呢?
图 4摇 ana鄄rLOX 在不同缓冲体系中的熔解温度
Fig. 4摇 T m of ana鄄rLOX treated by different buffer
2郾 4摇 不同缓冲体系对 ana鄄rLOX 构象的影响
2郾 4郾 1摇 不同缓冲体系对 ana鄄rLOX 远紫外区 CD 光
谱的影响
图 5 中给出不同缓冲体系处理的 ana鄄rLOX 的
CD 光谱,从 CD 光谱曲线中可以观察到 195 nm 处
的正峰以及 208,222 nm 处的两个负峰,它们由多肽
链的酰胺 仔鄄仔 和 n鄄仔 跃迁所致, 属于 倩鄄螺旋结
构 [17] 。 由图 5 可知, 不同缓冲体系对 ana鄄rLOX 的
CD 光谱的影响程度不同 ,在不同缓冲体系中的 ana鄄
rLOX 的 CD 光谱曲线,谱峰峰位和峰高均发生了不
同程度的变化。
图 5摇 不同缓冲体系中 ana鄄rLOX 的 CD 光谱
Fig. 5摇 CD spectra of ana鄄rLOX treated by different buffer
不同缓冲体系中的 ana鄄rLOX 的 CD 光谱在
195nm 处的正峰峰位,在 pH 值 为 5 和 9 时此峰位
上没有明显正峰 ,在 pH 值 为 6,7,8 时 ,此正峰峰位
发生红移, 从 pH 值为 6 时的 195 nm 红移至 pH 值
为 7、pH 值为 8 的 198 nm,红移了 3 nm; 并且正峰峰
高在 pH 值为 7 时达到最高,随后下降。
不同缓冲体系中的 ana鄄rLOX 的 CD 光谱在
208,222 nm 处的负峰峰位有不同程度的蓝移。 pH
值为 5,6 时 ,在 208 nm 处没有负峰 ;pH 值为 8 时负
峰峰高最大 ,并随着 pH 值的增加, 峰高减少明显。
圆二色光谱变化表明 , 在不同缓冲体系中的 ana鄄
rLOX 的螺旋的质量分数有不同程度的变化,说明了
不同 pH 值条件下, 由于离子的作用使 ana鄄rLOX 二
级结构各单元之间发生转化 , 从而导致酶的活性和
稳定性发生变化 。
2郾 4郾 2摇 不同缓冲体系对 ana鄄rLOX 二级结构的影响
表 1 是利用 CONTINLL 软件计算 ana鄄rLOX 在
不同缓冲体系中的二级结构的变化情况 。 由表 1 可
知 ,ana鄄rLOX 在不同缓冲体系中各二级结构的质量
分数变化关系。
表 1摇 不同缓冲体系对 ana鄄rLOX 二级结构的影响情况
Tab. 1摇 Contents of secondary structures of
ana鄄rLOX treated by different buffer %
pH 螺旋 折叠 转角 无序
5 25郾 70 0 31郾 50 42郾 80
6 20郾 30 25郾 10 20郾 50 34郾 20
7 19郾 10 25郾 90 20郾 60 34郾 40
8 22郾 00 16郾 50 25郾 60 35郾 80
9 26郾 50 0 33郾 50 40郾 10
10 28郾 4 0 34郾 60 37郾 00
螺旋结构的质量分数的变化 随着 值
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第 33 卷 第 4 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 汪晓鸣等: 酸碱度对重组鱼腥藻脂肪氧合酶构象与活性的影响