1郾 3郾 3摇
蛋白含量的测定方法及指标
1郾 3郾 3郾 1摇 BCA
试剂盒法测定蛋白质含量
使用
BCA(bicinchoninic acid)
试剂盒测定可溶
性蛋白浓度
。
标准曲线的绘制
:
取牛血清白蛋白标
准品用磷酸盐缓冲液配制质量浓度为
0郾 5 g / L,
将标
准品按
0,2,4,6,8,12,16,20 滋L
加到
96
孔板的蛋
白标准品孔中
,
加
PBS
至
20 滋L,
各孔加入
200 滋L
BCA
工作液
,37 益
放置
20 min,
在
562 nm
下测定吸
光度
,
绘制标准曲线
。
取样品放入
96
孔板
,
加
PBS
至
20 滋L,
加
200
滋L BCA
工作液
,37 益
水浴
30 min,
冷却至室温
,
在
A
562
下
,
用酶标仪测定
OD
值
。
1郾 3郾 3郾 2摇
凯氏定氮法
根据
GB 5009郾 5—2010
中凯氏定氮法测定样品
中蛋白含量
。
1郾 3郾 3郾 3摇
蛋白含量测定指标
花生粕中
4
种蛋白的提取率和质量分数根据式
(1)、
式
(2)
计算
。
蛋白质提取率
=
提取上清液中蛋白质含量
原料中蛋白质含量
伊 100% ; (1)
蛋白质纯度
=
冷冻干燥后浓缩蛋白样品中蛋白质含量
冷冻干燥后浓缩蛋白样品质量
伊 100% 。
(2)
1郾 3郾 4摇
扫描电镜观察
4
种花生蛋白
将处理后的花生蛋白样品均匀固定在贴胶的电
镜进样台上
,
放入
HVS -SGB
喷金机
,
真空条件下进
行样品的喷金
,
然后固定在载物台
,
调节最佳视野和
放大倍数进行观察
。
2摇
结果与讨论
2郾 1摇
清蛋白提取工艺优化结果
2郾 1郾 1摇
不同提取条件对清蛋白提取的影响
提取温度对清蛋白提取的影响如图
2( a),
随着
温度的升高
,
蛋白质含量明显增加
,
当提取温度升高
至
40 益
时
,
蛋白质含量无明显增高
,
故得出清蛋白
提取的较佳温度为
40 益。
提取时间对清蛋白提取的影响如图
2(b),
随着
提取时间的增长
,
蛋白含量明显增加
,
增至
10 min
时
,
蛋白含量达到最大值
。
由于时间的增加清蛋白
溶解后会发生少量水解
[17]
,
导致
10 min
后蛋白质含
量呈下降趋势
,
故清蛋白提取的较佳时间为
10 min。
料液比对清蛋白提取的影响如图
2( c),
随着料
液比的增加
,
蛋白含量明显增加
,
增至
1颐 12
后
,
蛋白
质含量无明显增加
。
花生粕中含有一定淀粉
、
糖类
、
膳食纤维等物质
,
吸水膨胀
[18]
,
因此当提取剂量少
时溶液黏稠不易使花生粕与水混溶
,
不易提取出蛋
白质
,
从而蛋白质含量较低
。
相应提高料液比可提高
蛋白质提取率
,
故清蛋白提取较佳料液比为
1颐 12。
图
2摇
提取条件对花生粕清蛋白提取液吸光度的影响
Fig. 2摇 Effects of extraction condition on extraction of albumin
2郾 1郾 2摇
清蛋白正交试验结果分析
表
2
为清蛋白提取正交试验结果
。
由表
2
的极
差分析结果可以得出
,
R
A
>
R
C
>
R
B
,
提取温度
、
时
间
、
料液比对花生粕清蛋白提取的影响大小依次为
提取温度
(
A
)、
料液比
(
C
)、
提取时间
(
B
)。 3
个因
素中提取温度对清蛋白的提取影响较为显著
。
在实
验设计范围内
,
优化得到的超声提取花生粕清蛋白
的较佳条件为
A
3
B
3
C
2
,
即提取温度
50 益,
提取时间
12 min,
料液比
1颐 12。
2郾 2摇
球蛋白提取工艺优化结果
2郾 2郾 1摇
不同单因素对球蛋白提取的影响
提取温度对花生球蛋白提取的影响如图
3( a),
随温度的增加
,
蛋白含量明显增加
,
增至
50 益
后
,
由
于球蛋白溶解后发生少量变性导致蛋白含量明显下
降
,
故球蛋白的较佳提取温度为
50 益。
提取时间对花生粕球蛋白的影响如图
3(b),
随
73
第
33
卷 第
3
期
摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
李
摇
婷等
: 4
种花生蛋白的分级提取及其结构的扫描电镜观察
