食品科学技术学报 - page 22

别是在肿瘤的放射治疗中,这种伤害更为严重[4] 。
免疫器官是生物体放射敏感的靶器官之一 。 免
疫器官对辐射的反应,表现为免疫细胞数量减少 、抗
体形成抑制和细胞因子网络调节失常, 最终导致免
疫功能障碍, 继而引起一系列并发症 。
黑番茄原产自南美洲,因其果色黑红而得名 ,营
养价值高,特别适合鲜食,还含有大量的茄红素及抗
氧化剂。 其番茄红素(28郾 04 mg / kg),花青素 (89郾 71
mg / kg),维生素 C (27郾 94 mg / g), 维生素 E (218郾 6
mg / g)质量比均比普通的番茄要高 [5] 。
本实验拟通过评价黑番茄冻干粉对小鼠的辐射
防护作用进行探讨, 同时对于保护作用的调控机制
进行研究。
1摇 材料与方法
1郾 1摇 实验动物与分组
6 ~ 8 周 ICR 小鼠 , 体重 18 ~ 22 g,共 50 只, 均
分为 5 组 ,每组 10 只 。 分别为 :A, 正常对照组 ;B,
辐射对照组; C, 辐射 + 黑番茄低剂量组 ( 1郾 5
g / (kg·d) - 1 ); D, 辐射 + 黑番茄中剂量组 ( 3郾 0
g / (kg·d) - 1 );E, 辐射 + 黑番茄高剂量组 ( 4郾 5
g / (kg·d) - 1 )。 黑番茄冻干粉购自甘肃大漠紫光生
物科技有限公司, 水溶后每天灌胃一次,正常对照组
灌胃蒸馏水。
1郾 2摇 辐射种类与剂量
60 Co 酌 射线一次性全身照射 5 Gy。 除正常对照
组, 其他各组均进行辐射。 照射前分别按分组设定
剂量经口给予小鼠受试物 14 d。
1郾 3摇 胸腺及脾脏称重及指数计算
拉颈处死小鼠,无菌取胸腺和脾脏,称量胸腺和
脾脏质量,计算胸腺和脾脏指数;
胸腺指数 = 胸腺质量(mg) / 体重(g);
脾脏指数 = 脾脏质量(mg) / 体重(g)。
1郾 4摇 外周血白细胞( WBC) 计数
血采至 EDTA 抗凝管中, 利用 CASY 自动细胞
计数仪进行外周血白细胞计数。
1郾 5摇 骨髓有核细胞计数
取一侧股骨, 用 2 mL 生理盐水冲洗骨髓有核细
胞至离心管中,裂解红细胞并稀释后, 细胞计数仪计
数, 计算骨髓有核细胞总数。
1郾 6摇 脾淋巴细胞制备及培养
拉颈处死小鼠, 无菌取脾,研磨过筛, 制备脾淋
巴细胞悬液 ,离心去上清, 加 1 mL 红细胞裂解液, 吹
散 ,室温放置 2 ~ 3 min 后 , 加培养基中止反应; 用
RPMI 1640 培养液清洗细胞 3 次 , 进行计数, 用
RPMI 1640 培养液悬浮细胞 , 调整细胞密度为
4 伊 109 / L。
1郾 7摇 T 淋巴细胞增殖的测定
取上述制备的小鼠脾淋巴细胞, 加入 96 孔板 ,
每样均分为对照组和刺激增殖组 , 刺激增殖组加
ConA, 终质量浓度为 5 mg / L;每样加 5 个复孔, 放至
37 益、体积分数为 0郾 05% CO2 培养箱中培养 69 h。
CellTilter 96 比色法测定 T 淋巴细胞增殖, 加入
CellTilter 96 试剂,继续培养 3 h,在酶标测定仪波长
为 492 nm 处测定光密度(A) 值 。 所得 A 值即表示
淋巴细胞活性。
T 淋巴细胞增殖(A) = 加 ConA 刺激孔 A 值 -
未加 ConA 对照孔 A 值。
1郾 8摇 血清中细胞因子水平的测定
基于微球技术的多参数检测技术 ( CBA) 能够
从单一样本中同时检测多种目的蛋白,操作简单, 省
时省力 ,样本需要量小,与以往的技术相比具有更高
的灵敏度、 更好的重复性和更宽的测量范围。 由于
本实验中可采集的小鼠血清量较少, 用常用的检测
方法( 如 ELISA 法) 最多能检测 4 ~ 5 种细胞因子 ,
并不能够表现复杂的细胞因子免疫调节网络 , 故选
用流式微球技术同时测定血清中细胞因子的水平 。
采用流式微球矩阵 ( cytometric bead array,
CBA) 技术。 使用 Bender Medsystems 试剂盒中的细
胞因子标准品按照梯度法稀释成 7 种浓度加上空白
对照管 ,制备细胞因子标准曲线。 吸取待测血清 25
滋L 置于待检管, 同时加入 25 滋L 捕获微球、50 滋L
Biotin 结合抗体。 室温避光孵育 2 h 后, 洗 2 次 , 弃
上清, 加入 50 滋L PE。 再室温避光孵育 1 h 后 ,洗 2
次 ,弃上清 , 加入 300 滋L 洗液后, 上流式细胞仪检
测 。 使用 BD CellQuest 软件包收集数据 。 分别对
IL鄄1琢、IL鄄6 和 IL鄄10 进行测定。
1郾 9摇 SOD、 MDA 和 GSH鄄Px 含量的测定
股动脉取血 , 用于检测血清 SOD; 取肝脏组织
块制成体积分数为 10% 组织匀浆, 离心机离心取上
清液, 冰箱冷藏,用于测定。 血清和肝脏超氧化物歧
化酶(SOD)、肝脏丙二醛 (MDA)和肝脏谷胱甘肽过氧
化物酶(GSH鄄Px)含量的测定依照试剂盒说明进行。
1郾 10摇 I鄄资B 和 NF鄄资B 表达情况的测定
用 TRIzol( invitrogen) 提取总 RNA,将匀浆样品
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第 33 卷 第 1 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 韩晓龙等: 黑番茄冻干粉对小鼠辐射防护作用的研究