76 - 食品科学技术学报页

公司.
1郾 2摇 液相色谱条件
流动相为乙腈和体积分数为 0郾 1% 甲酸的水溶
液, 梯度洗脱为 0 ~ 0郾 5 min, 乙腈保持 10% ;0郾 5 ~
6郾 5 min, 乙腈由 10% 升至 90% ;6郾 5 ~ 9 min, 乙腈保
持 90% ;9 ~ 9郾 5 min, 乙腈由 90% 降至 10% ;9郾 5 ~
13 min, 乙腈保持 10% ; 流速 0郾 2 mL / min, 柱温
25 益; 进样量 10 滋L.
1郾 3摇 质谱条件
电喷雾离子源,正离子模式; 喷雾电压 3 500 V;
离子源温度为室温; 鞘气压力为 35 psi (2郾 07 伊 105
Pa);辅助气压力为 10 ATM(1郾 01 伊 106 Pa);离子传
输毛细管温度为 350 益;碰撞气体为氩气,1郾 5 m torr
(0郾 20 Pa);质谱 divert valve 状态为 0 ~ 8 min 处于
waste 状态,8 ~ 10 min 处于 load 状态,10 ~ 13 min 处
于 waste 状态; 选择反应扫描 ( selective reaction mo鄄
nitoring,SRM) 模式检测,定量离子及定性离子利用
仪器优化选出. 碰撞能量采用仪器优化出的数值,
质谱分析离子碎片以及优化后的碰撞能量见表 1.
表 1摇 孔雀石绿及隐色孔雀石绿的离子碎片及碰撞能量
Tab. 1摇 Product ions and collision energy of malachite
green and leucomalachite green
分析物 母离子( m / z ) 子离子( m / z) 撞碰能量 / v
329 313 34
孔雀石绿 329 208 35
329 165 60
331 239 29
隐色孔雀石绿 331 316 19
331 223 52
1郾 4摇 溶液配制
1郾 4郾 1摇 流动相的制备
体积分数为 0郾 1% 甲酸的水溶液制备方法是吸
取 0郾 5 mL 甲酸加入到 500 mL 水中 ,经 0郾 22 滋m 水
相滤膜过滤.
1郾 4郾 2摇 标准溶液的制备
准确吸取 0郾 5 mL 的孔雀石绿标准溶液至 50
mL 容量瓶中,用甲醇定容, 得 1 滋g / mL 的孔雀石绿
标准溶液. 准确称取 50 mg 的隐色孔雀石绿标准溶
液至 50 mL 容量瓶中 ,用甲醇定容, 得 1 000 滋g / mL
的隐色孔雀石绿标准溶液. 准确吸取 0郾 1 mL 的隐
色孔雀石绿标准溶液至 100 mL 容量瓶中,用甲醇定
容, 得 1 滋g / mL 的隐色孔雀石绿标准溶液. 各从 1
滋g / mL 的孔雀石绿及隐色孔雀石绿标准溶液中分
别吸取 0郾 025, 0郾 05, 0郾 1,0郾 2,0郾 25 mL 加入到 5 个
各加入 5 g 空白鱼肉样品的 50 mL 带有刻度的离心
管中, 用甲醇溶液定容至 25 mL,充分振荡 ,得 1, 2,
4, 8,10 ng / mL 的标准系列工作溶液 . 每个浓度溶
液经 0郾 22 滋m 有机滤膜过滤后, 取 10 滋L 注入高效
液相色谱- 串联质谱仪进行分析.
1郾 4郾 3摇 样品前处理
准确称取经样品料理机粉碎的待测鲜鱼肉样品
5 g,加入至 50 mL 刻度离心管中, 在样品中加入甲
醇定容至 25 mL,充分振荡, 静置后取上清液经 0郾 22
滋m 有机相滤膜过滤后, 取 10 滋L 注入高效液相色
谱 -串联质谱仪 ,进行分析.
2摇 结果与讨论
2郾 1摇 样品前处理
在众多的检测水产品中孔雀石绿及隐色孔雀石
绿的方法中 ,样品处理液的制备过程通常是采用一
系列净化操作过程, 操作较为烦琐并且浪费时间, 且
在固相萃取时如果操作不慎会使回收率下降且使分
析结果重复性变差, 由于孔雀石绿及其代谢物易溶
于甲醇 、乙腈等有机溶剂 ,且蛋白 、脂肪这些样品中
主要成分不易溶于甲醇、乙腈, 但是乙腈提取液在静
置后较为浑浊, 需要净化 . 本文采用甲醇直接浸泡
提取鲜鱼肉中孔雀石绿及隐色孔雀石绿, 样品处理
液用 0郾 22 滋m 的有机滤膜过滤后 ,就注入高效液相
色谱仪 - 串联质谱联用仪中进行检测. 考虑到在电
喷雾质谱分析中 ,复杂基质的样品可能会产生与分
析物竞争电荷降低离子化效率的基质效应 , 本文通
过使用空白样品添加标准品来制作标准曲线 , 以消
除样品的基质效应以及校正回收率 ,经过试验证明,
方法准确度较高 .
2郾 2摇 色谱图
实验得到孔雀石绿及其代谢物标准样品 、 空白
样品、 加标空白样品的总离子流( total ion chromato鄄
gram,TIC) 图分别如图 1、图 2 和图 3. 加标后鲜鱼
肉样品不经过色谱柱分离 ,而直接在 m / z 311 ~ 315
u 进行全扫描质谱分析见图 4. 孔雀石绿及其代谢
物的出峰时间在 8 ~ 10 min. 在该色谱质谱条件下,
实验结果良好.
2郾 3摇 标准曲线和检出限
在实验条件下, 以峰面积 y 为纵坐标, 质量浓度
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第 32 卷 第 6 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 宗万里等: HPLC-MS / MS 法快速测定鲜鱼肉中孔雀石绿及其代谢物含量