7 - 食品科学技术学报页
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炼菜籽油中成功提取出
DNA,
并用于
PCR
扩增
.
针
对精炼植物油中
DNA
的有效提取
,Costa
等
[31]
同时
采用
Wizard、 CTAB
以及试剂盒
Wizard
襆
Magnetic
DNA purification system
和
Nucleospin
襆
提取精炼大
豆油中的
DNA,
通过对大豆内源基因
lectin
的扩增
发现
,
只有
Nucleospin
襆
提取出的
DNA
扩出了目的
条带
.
白立群等
[32]
采用冷冻干燥法能够有效地从
精炼大豆油中提取出
DNA.
但植物油中的
DNA
非
常不稳定
,
随着储藏时间的延长容易发生更严重的
降解
. Pafundo
等
[33]
利用
AFLP
的方法研究了储藏
时间对橄榄油中
DNA
的影响
,
结果表明橄榄油
DNA
的提取最好在压榨后一个月内进行
,
否则大量
DNA
降解后会影响到实验的可靠性
.
2郾 2摇 PCR
技术
PCR(polymerase chain reaction)
是一种体外酶
促合成特异
DNA
片段的方法
,
由高温变性
、
低温退
火及适温延伸等几步反应组成一个周期
,
循环进行
,
使目的
DNA
得以迅速扩增
. PCR
可以对物种的特
异基因进行有效扩增
,
从而达到物种鉴别的目的
.
在常规
PCR
体系中加入一条标记了荧光基团的探
针
,
利用荧光信号积累实时监测整个
PCR
进程的方
法称之为实时荧光
PCR
方法
,
它不仅可以进行定性
分析
,
还可以通过建立标准曲线对未知模板进行定
量分析
.
目前
,
实时荧光
PCR
大量应用在食品中转
基因成分检测
[34 - 35]
、
食品中动物种类鉴别
[36 - 37]
以
及过敏原检测
[38 - 39]
等方面
.
在食用油种类鉴别上
也有相关报道
. Zhang
等
[40]
针对油棕榈的特异基因
MT3鄄B
设计了引物和探针
,
同时用普通
PCR
和实时
荧光
PCR
进行扩增
,
可以检测到
5
个拷贝的棕榈
DNA. Vietina
等
[41]
等采用高溶解曲线实时荧光
PCR
建立了榛子油
、
玉米油
、
葵花籽油
、
花生油
、
芝
麻油
、
大豆油
、
米糠油和南瓜油的鉴别方法
.
2郾 3摇
分子标记技术
DNA
分子标记是指能反映生物个体或种群间
基因组中某种差异的特异性
DNA
片段
.
分子标记
的主要类型有
AFLP( amplified fragment length poly鄄
morphism ), RAPD ( random amplified polymorphic
DNA), SSR ( simple sequence repeat ), SCAR ( se鄄
quence characterized amplified regions), RFLP ( frag鄄
ment length polymorphism),SSCP( single鄄strand con鄄
formation polymorphism)
等
,
除
RFLP
外
,
其他分子标
记技术都需要借助
PCR
技术
.
在植物油种类鉴别
中
,
目前主要用于橄榄油品种溯源
[42 - 43]
. Wu
等
[44 - 45]
针对植物的叶绿体基因设计两对通用引物
,
利用
PCR鄄CE鄄SSCP
技术来区分不同种类的植物油
,
从而识别橄榄油中掺入的其他植物油
.
有学者采用
基因条码技术
,
对特定区域
DN
片段扩增产物进行
测序
,
进而通过寻找
SNP( single nucleotide polymor鄄
phism)
位点
,
达到对橄榄油中掺假油品鉴定的
目的
[46 - 47]
.
每种
DNA markers
都有其优缺点
,RAPD
重复
性差
;AFLP
适合于评价不同品系之间的差异
,
但不
适合混合油的检测
;SSR
用得最多
,
能用于高通量的
基因分型平台
,
在对食用油进行分析时应该选择合
适的
SSR
位点以及长度
;SSCP
对一个碱基差也能区
分开
,
可以分析降解的
DNA,
但往往需要测序进行
验证
.
由于植物油中是大小不一的
DNA
片段
,
合适
的
DNA marker
必须能保证一定的区分力
、
油料和油
的一致性
、
结果的重复性以及分析的简便性
.
否则
会影响到结果的准确性
.
2郾 4摇
生物芯片技术
生物芯片技术
( biochip)
是指将大量生物大分
子如核酸
、
蛋白
、
多肽甚至组织切片
、
细胞等生物样
品有序地固化于支持物的表面
,
然后与已标记的待
测生物样品中靶分子杂交
,
通过杂交信号的强度判
断样品中靶分子的数量
.
根据固定的探针的种类
,
生物芯片可分为
:
基因
芯片
、
蛋白芯片
、
细胞芯片和组织芯片
;
按照检测载
体又可分为固相芯片和液相芯片
.
传统固相芯片技
术需要特定的仪器设备对杂交信号进行检测
,
可视
芯片作为一种新型的固相芯片技术
,
可以将杂交信
号在酶的催化作用下沉积在芯片表面
,
通过芯片厚
度的变化而改变芯片颜色从而实现对检测结果的判
定
.
由于该方法不需要特殊的仪器设备
,
方便快捷
,
结果肉眼可见
,
具有很好的应用前景
.
目前已有学
者将该技术用于食源性致病菌
、
食品中转基因成分
和过敏原的检测
[48 - 50]
. 2011
年
Bai
等
[51]
建立了
8
种油料作物的可视芯片鉴别方法
,
为今后准确鉴别
8
种植物油提供了思路
.
液相芯片技术也称为微球体悬浮芯片
( suspen鄄
sion array,liquid chip)
是一种芯片技术与流式细胞
术相结合的技术
.
该技术将
DNA、
抗体等附着于微
球表面作为探针
,
在液相中与标记有荧光报告分子
的待测物杂交
,
当微球探针与目标物结合时
,
借助流
式细胞仪检测微球表面荧光标记物
,
从而达到对目
标物的检测
.
目前该技术主要用于
SNP
基因分
4
食品科学技术学报
摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
摇 2014
年
11
月
