酶联免疫法
( enzyme linked immunosorbent as鄄
say, ELISA)
具有检测速度快
,
适用范围广
,
特异性
强
,
准确性高的特点
,
是免疫分析中应用最广的方
法
[18]
。 ELISA
法首先将酶标记的抗体
/
抗原固定
,
然后在其中进行免疫反应和酶促反应
,
最后通过酶
作用于底物显色进行辨别
。
目前
,
科研工作者已经
建立了一系列农兽药检测的
ELISA
法
,
并制备了
666、DDT、
对硫磷
、
克仑特罗
、
氯霉素
、
磺胺类等药物
的快速检测试剂盒
[19 -20]
。
此外
,
该项技术还被应用于
检测食品中一些有害微生物
,
如金黄色葡萄球菌
、
沙门
氏菌
、
单核增生李斯特菌和大肠埃希氏菌等
[21]
。
免疫胶体金法是以胶体金作为示踪标记物的免
疫分析方法
,
相比前一种免疫分析方法
,
这是一种新
型的免疫分析方法
。
该方法是利用还原剂如白磷
、
抗坏血酸
、
枸橼酸钠
、
鞣酸
、
柠檬酸钠等将氯金酸
(HAuCl
4
)
溶液中的金离子还原成金原子
,
并在静电
作用下聚合形成稳定的胶体溶液
。
由于胶体金颗粒
聚集达到一定程度时会出现肉眼可见的粉红色斑
点
,
因此可作为免疫层析实验的指示物
[22]
。
免疫胶
体金技术具有快速简便
、
稳定性强
、
特异敏感等特
点
,
此外
,
该技术不需要特殊设备和试剂
,
结果判断
直观
,
可以进行定性及半定量分析
。
目前
,
国内外已
经开发出了一系列相对成熟的试纸条
,
并将该方法
用于食品中有害微生物
、
农药
、
兽药
(
如磺胺类药
物
、
氯霉素
)、
黄曲霉毒素
、
盐酸克伦特罗残留以及
吗啡和罂粟碱的检测
,
为现场执法提供了较好的科
学依据
[23 - 29]
。
2郾 3摇
分子生物学方法
分子生物学技术以病原菌的保守核苷酸序列作
为检测标靶
,
来及时
、
安全
、
准确地检测食品中是否
有病原菌的存在
。
其中
,
由于聚合酶链式反应
( pol鄄
ymerase chain reaction, PCR)
检测法
、
基因探针检测
法和基因芯片检测法等分子生物学方法具有灵敏度
高
、
特异性强
、
简便快速的特点而备受关注
[30 - 31]
。
PCR
技术是利用
DNA
在温度变化时变性与复
性原理
,
在引物的引导和脱氧核糖核苷酸
(dNTP)
等
参与下
,
利用
DNA
聚合酶对模板
DNA
进行复制扩
增
,
使其在短时间内增加百倍
。
此方法在沙门氏菌
、
金黄色葡萄球菌
、
肠出血性大肠杆菌
、
李斯特菌
、
志
贺菌
、
绿脓杆菌和副溶血性弧菌等多种致病菌的检
测中的应用均有报道
,
具有操作简单
、
快速
、
灵敏度
高和样品纯度要求低等优点
[32 - 34]
。
随着分子生物
学技术的不断发展
,
实时定量
PCR、
免疫捕获
PCR、
多重
PCR、
标记
PCR
等技术的出现
,
进一步提高了
检测灵敏度
,
缩短了检测周期
。
实时定量
PCR
应用
了荧光探针
,
通过测定荧光信号变化
,
对
PCR
进程
进行实时检测
,
不仅可以得到病原菌的定性检测结
果
,
还可对其数量准确定量
。
实时定量
PCR
目前已
应用于食品中沙门氏菌
、
志贺氏菌
、
单核增生李斯特
菌
、
金黄色葡萄球菌等的快速检测
[30 - 32]
。
此外
,
将
PCR
技术与免疫磁珠技术结合
,
可实现从样品中选
择性地快速富集目标病原菌
,
缩短增菌过程
,
提高精
准性
,
达到快速检测的目的
。 Notzon
等
[35]
将定量
PCR
技术与免疫磁珠技术相结合
,
实现了在
12 ~ 13
h
内检测出肉类食品中的沙门氏菌
。
基因探针技术又称分子杂交技术
,
是将病原菌
保守基因
DNA
双链中的一条标记成
DNA
探针
,
通
过检测样品与标记性
DNA
探针能否进行特异性结
合
,
来检测样品中是否具有该种病原菌
,
通常采用放
射性同位素
32P
标记探针
。
该技术在食品微生物检
测中应用广泛
,
具有灵敏
、
快速的优点
,
且能够排除
其他微生物的干扰作用
[30]
。
目前
,
已有多种基于此
种技术的试剂盒问世
,Gene鄄Trak
公司采用该项技术
研制出了一系列致病菌检测试剂盒
,
能够成功地检
测食品中沙门氏菌
、
李斯特菌
、
大肠杆菌
、
金黄色葡
萄球菌
、
弯曲菌等致病菌
[36]
。
基因芯片技术是采用光导原位合成或显微打印
手段
,
将大量特定的寡核苷酸片段或基因片段作为
探针
,
密集
、
有序地固定于经过相应处理的载体表
面
,
然后加入待测样品进行杂交
,
通过检测杂交信
号
,
来确定受检样品的信息
。
该技术具有准确
、
快
速
、
易于操作等优点
,
并允许一次性对大量样品进行
检测和分析
,
常用于检测食品中常见致病细菌及其
毒素
、
真菌毒素
、
病毒等微生物
[37]
。
法国生物梅里
埃公司的
Gen鄄Probe
系统
,
采用该项技术
,
以致病菌
rRNA
为靶核苷酸
,
将标记物探针与目标
rRNA
杂
交
,
能够快速检测出食品中的金黄色葡萄球菌
、
弯曲
杆菌等
[38]
。
上海市农业科学院制作的转基因农产
品检测试剂盒
,
可系统检测大豆
、
油菜
、
玉米等多种
转基因农产品的外源基因和表达调控元件
,
用时短
,
灵敏度高
,
符合国际检测要求
[39]
。
2郾 4摇
酶抑制技术
酶抑制技术是利用有机磷和氨基甲酸酯类农药
为乙酰胆碱酯酶的底物结构类似物
,
能够使乙酰胆
碱酯酶催化中心中
Ser
残基中的羟基发生磷酸化和
甲胺酰化
,
而使乙酰胆碱酯酶失活来检测食品中的
07
食品科学技术学报
摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
摇 2015
年
7
月
