Page 41 - 《食品科学技术学报》2026年第1期

第 ࿗࿗ 卷第 ϟ 期জজজজজজ 吕জ 昂等᧥ 柠檬酸杆菌黑芥子酶的高效表达及其对萝卜红色素异味的脱除作用 ሕ Ꭾ

ԣᤫ ԣই ࣷቂᡥʗ 高密度发酵与纯化分析 带逐渐变粗ᖔ 发酵液中的蛋白含量逐渐增加ᤥ 经
ऊቝᢃʢ 重组菌株的高密度发酵结果见 图 ሕᤥ 由 ͐᥋୩ᔀᡱၤᑕʢᆍ༁ᔀ 阴离子交换层析柱进一步纯化ᖔ得到电
图 ሕྉᑕɯ可知ᖔ发酵 ϟሕ԰ ၤ 后发酵液中酶活力最高达 泳级纯酶Џ图 ሕྉዹɯ૒ᖔ分子质量 Ꭾԡ Ҵ᧕ᑕ 左右ᖔ与预测
到 ࿗ሕሕ᥊ ԰ В ᣰ ቝᓂᖔ蛋白质质量浓度和细胞的质量浓度 分子质量相近ᤥ 重组黑芥子酶 ऊቝᢃʢ 的纯化结果见
分别为 ᤃ᥊ ऐ ቝ੫ ᣰ ቝᓂ 和 ࿗԰ԡ ቝ੫ ᣰ ቝᓂᤥ 由图 ሕྉᤦɯ可知ᖔ 表 ԰ᤥ 表 ԰ 显示ᖔ该酶的回收率为 ጢऐ᥊ ᤃᠮ ᖔ纯化倍数
随着发酵时间的延长ᖔ୩᧕୩ ͱ ۪ዶ᥈ጶ 电泳中的目标条 为 ϟ᥊ ጢ 倍ᖔ比酶活为 ϟ࿗ᤃ В ᣰ ቝ੫ᤥ

图 ሕজ 重组毕赤酵母高密度发酵和电泳分析

èᔽ੫঎ ሕজ ̀ᔽ੫ၤ ዹᔀ᤟᤟᥋ʛᔀႿ༁ᔽᡷᢃ ஦ᔀʢቝᔀႿᡷᑕᡷᔽᆍႿ ᆍ஦ ʢᔀዹᆍቝᤦᔽႿᑕႿᡷ ᣞॹ ᡓ၊ᐹஏஏᔠᔠ ᑕႿʛ
ᔀ᤟ᔀዹᡷʢᆍᡱၤᆍʢᔀᡷᔽዹ ᑕႿᑕ᤟ᢃ༁ᔽ༁

表 ԰জ 重组黑芥子酶 ऊቝᢃʢ 的纯化结果
ఋᑕᤦ঎ ԰জ ۪ࣼʢᔽ஦ᔽዹᑕᡷᔽᆍႿ ʢᔀ༁ࣼ᤟ᡷ༁ ᆍ஦ ʢᔀዹᆍቝᤦᔽႿᑕႿᡷ ቝᢃʢᆍ༁ᔽႿᑕ༁ᔀ ऊቝᢃʢ
纯化步骤 总酶活力 ᣰВ ቂྉ 总蛋白ɯ ᣰቝ੫ 比酶活 ᣰྉ Вኼቝ੫ ͱϟ ɯ 纯化倍数 回收率 ᣰᠮ
ᤦ
ᑕ
粗酶液 ԰ ࿗ँԡ঎ँ ԰ጢ঎ᤃ ँᎮ঎ሕ ϟ঎ ԡ ϟԡԡ঎ԡ
͐᥋୩ᔀᡱၤᑕʢᆍ༁ᔀ 阴离子柱 ϟ ࿗ᤃԡ ϟԡ ϟ࿗ᤃ ϟ঎ ጢ ጢऐ঎ ᤃ
জজ ᑕ 表示酶活力的测定是在 ԰ԡ ቝቝᆍ᤟ ᣰ ᓂ ఋʢᔽ༁᥋̀ऊ᤟ 缓冲液ྉᡱ̀ 值为 Ꭾ᥊ ԡɯ 中ᖔ以 ԰ቝ੫ ᣰ ቝᓂ 黑芥子硫苷酸钾水合物ྉ ୩ᔽႿᔽ੫ʢᔽႿɯ 为底物ᖔ࿗ԡ ቩ 反应 ϟԡ
ቝᔽႿଫᤦ 表示蛋白质含量用 ᓂᆍʢʢᢃ 法 Џ԰ϟ૒ 测定ᖔ以牛血清蛋白为标准ᤥ

জজ 迄今为止ᖔ植物源提取的黑芥子酶研究较多ᖔ但 ዶఋ᥈᥈ϟ 在 ᣞ᥊ ᡓ၊ᐹஏஏᔠᔠ 中表达ᖔ高密度发酵 ϟᤃ࿗ ၤ 后ᖔ
提取率低ᖔ纯化困难ᖔ异源表达是提高该酶产量的有 酶活力为 ԰Ꭾ В ᣰ ቝᓂ Џϟ԰૒ ᤥ 甘蓝蚜虫来源的黑芥子酶
效手段之一 Џϟ૒ ᤥ 目前已报道的异源表达策略所得 ାᥘɟ኏ 在 ᣞ᥊ ᡓ၊ᐹஏஏᔠᔠ 中表达ᖔ甲醇诱导 ϟ԰ԡ ၤ 后ᖔ酶活
酶活力虽有所提高ᖔ但仍然较低ᤥ 拟南芥黑芥子酶 力仅为 ԡ᥊ ᤃ࿗ В ᣰ ቝᓂ Џϟ૒ ᤥ 拟南芥黑芥子酶 ዶᡷఋ᥈᥈࿗ 在