20 mmol Tris鄄
马来酸缓冲液
(50 mmol KC1鄄20 mmol
Tris鄄
马来酸
,
0郾 5 mol / L
NaOH
中和
),
用搅拌机
匀浆
,
低温离心
(9 000 r / min,10 min,4 益),
取出后
弃去上清液
,
按此方法重复洗涤
2
.
沉淀与
20
mmol Tris鄄
马来酸缓冲液
(0郾 6 mol KC1鄄20 mmol Tris鄄
马来酸
,
0郾 5 mol / L
NaOH
中和
)
用搅拌机匀
,
放入冰箱于
4 益
提取
60 min,
取出后低温离心
(9 000 r / min,30 min,4 益),
所得上清液为实验用肌
原纤维蛋白溶液
[17]
.
分别在草鱼肌原纤维蛋白中
添加魔芋葡甘聚糖的降解产物
,
魔芋葡甘聚糖降解
产物的添加量为
0郾 5% ,
而商用抗冻剂
(4%
蔗糖
+
4%
山梨糖醇
)
的添加量为
8% .
1郾 3郾 3摇
盐溶性蛋白的测定
采用考马斯亮蓝
G250
[18]
.
1郾 3郾 4摇
抗冻剂冰点的测定
采用差示扫描量热法测定
,
在标准液体铝坩埚
中准确称取
10 ~ 30 mg
的样品
,
密封
,
设置扫描程序
:
初温
20 益
5 益 / min
降温至
- 60 益,
恒温
5
min,
1 益 / min
升温至
10 益,
恒温
5 min
[19]
.
2摇
结果与分析
2郾 1摇
魔芋葡甘聚糖辐照降解产物对肌原纤维蛋白
的冷冻保护作用
1摇
不同辐照剂量魔芋葡甘聚糖降解产物对
盐溶性蛋白含量的影响
Fig. 1 摇 Effect of KGM degradation at different irradiation
dose on content of salt soluble protein
分析魔芋葡甘聚糖降解产物与草鱼肌原纤维蛋
白盐溶性蛋白含量关系
,
结果见图
1.
由图
1
可看
,
随着辐照剂量的增大
,
草鱼肌原纤维蛋白中的盐
溶性蛋白含量呈上升趋势
.
5 kGy
的剂量辐照所
得到的降解产物作为抗冻剂
,
盐溶性蛋白的溶出量
4郾 08 mg / g,
为原来的
42郾 9% ;
辐照剂量为
20 kGy
,
盐溶性蛋白质量比达
5郾 27 mg / g,
为原来的
55郾 3% ,
5 kGy
高出
12郾 4% .
而在辐照剂量为
20
kGy
,
上升趋势开始逐渐减缓
.
实验结果表明
,5
种辐照剂量下的样品都具有一定的抗冻效果
,
其中
辐照剂量为
20 kGy
时样品的抗冻性已经达到了较
好的效果
,
选用该剂量样品为后续研究样品
.
2郾 2摇
魔芋葡甘聚糖盐酸降解产物对肌原纤维蛋白
的冷冻保护作用
分析魔芋葡甘聚糖盐酸降解产物与肌原纤维蛋
白中盐溶性蛋白含量的关系
,
结果见图
2.
由图
2
看出
,
随着降解时间的增长
,
草鱼肌原纤维蛋白中的
盐溶性蛋白含量均呈上升趋势
,
2 h
时趋于平稳
.
1 h
所得到的降解产物作为抗冻剂
,
盐溶性蛋白
的溶出量为
2郾 50 mg / g,
为原来的
26郾 2% ;
降解
2 h
,
盐溶性蛋白质量比到达高峰值
3郾 92 mg / g,
为原
来的
41郾 2% .
1 h
时高出
15% .
实验结果表明
,
盐酸降解样品具有一定的抗冻效果
,
其中降解时间
2 h
样品的抗冻性已经达到了较好的效果
,
选用
该样品为后续研究样品
.
2摇
不同酸处理时间魔芋葡甘聚糖降解
产物对盐溶性蛋白含量的影响
Fig. 2摇 Effect of KGM degradation at different acid hydrolysis
time on content of salt soluble protein
2郾 3摇
魔芋葡甘聚糖
茁鄄
葡聚糖酶降解产物对肌原纤
维蛋白的冷冻保护作用
魔芋葡甘聚糖
茁鄄
葡聚糖酶降解产物与肌原纤
维蛋白中盐溶性含量的关系见图
3.
由图
3
可看出
,
随着
茁鄄
葡聚糖酶降解时间的增长
,
草鱼肌原纤维蛋
白中的盐溶性蛋白含量均呈上升趋势
,
但整体的趋
势较为平缓
.
以降解
60 min
所得的
茁鄄
葡聚糖酶降
解产物作为抗冻剂
,
盐溶性蛋白的溶出量为
4郾 29
mg / g,
为原来的
45郾 1% ;
在降解
100 min
时盐溶性蛋
白质量比到达一个高峰为
5郾 25 mg / g,
为原来的
55郾 1% ,
60 min
高出
10% .
而降解时间在
100 min
后趋势开始逐渐变得平滑
.
酶解降解时间为
100
min,
样品的抗冻性已经达到较好的效果
,
选择该样
品为后续研究样品
.
71
32
卷 第
5
摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
俊等
:
魔芋葡甘聚糖降解产物对肌原纤维蛋白的冷冻保护作用
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