甲基氨基甲烷
(Tris)、
盐酸
、
氢氧化钠
、
磷酸二氢钾
、
铁氰化钾
、
三氯乙酸
、
三氯化铁等均为分析纯
。
1郾 2摇
主要仪器
SB-10A
型高速粉碎机
,
上海市蒲恒信息科技
有限公司
;U -3900
型紫外分光度计
,Hitachi High鄄
Technologies Corporation Tokyo Japan;THA - B
型气
浴恒温振荡器
,
金坛市恒丰仪器厂
。
1郾 3摇
实验方法
1郾 3郾 1摇
原料处理
选择长白山山脉的野生蜂花粉
,
收集后将其高
速粉碎
,
将粉碎后的蜂花粉粉末过
60
目筛
,
之后将
剩余粉末继续粉碎
,
重复上一步操作
,
直至所有粉末
全部通过
60
目筛网
,
于低温下保存
。
1郾 3郾 2摇
蜂花粉的破壁
采用复合破壁法对蜂花粉粉末进行破壁
。
首先
将蜂花粉粉末的水分质量分数提高至
30% ~ 35% ,
控制温度为
35 益,
持续
48 h,
然后在
45 益
下进行鼓
风干燥
,
将干燥后结成团块的蜂花粉再次进行高速
粉碎
,
这样做的目的是将坚硬的蜂花粉外壁变得容
易被溶剂浸透
,
易于内容物的释放
,
然后将二次粉碎
好的蜂花粉冷藏保存
。
1郾 3郾 3摇
蜂花粉的提取及得率的测定
取
5 g
破壁后的蜂花粉于离心管中
,
按
1颐 8
的比
例添加提取溶剂
,37 益
下摇床提取
1 h,350 W
超声
提取
30 min,5 000 r / min
离心
10 min
[5]
,
重复
3
次
(
超声时间依次减半
),
将
3
次提取液过滤后合并
,
旋转蒸发浓缩
,
将浓缩液置于恒温真空干燥箱
内
[6]
,45 益
下挥干其中溶剂
,
直至恒重后得浸膏状
固体
。
所得固体质量与原蜂花粉质量比
,
即为得率
。
1郾 3郾 4摇
维生素
C
标准溶液及提取物待测液的配制
分析天平准确称取
1郾 0 mg
抗坏血酸粉末
,
用无
水乙醇溶解后
,
定容至
50 mL
容量瓶
,
得
0郾 02 g / L
维生素
C
溶液
,4 益
避光保存
。
分析天平准确称取
一定质量的提取物定容至
25 mL
容量瓶中
,
得适当浓
度的提取物溶液
。
水提取物以水为溶剂
,
甲醇提取物
以甲醇为溶剂
,
三氯甲烷提取物以无水乙醇为溶剂
,
因
为三氯甲烷不稳定
,
在室温下极易挥发
、
分解
,
如以三
氯甲烷为溶剂
,
后续实验误差极大
,
无法进行
。
1郾 3郾 5摇
DPPH
清除能力的测定
根据参考文献
[7 - 8]
等的方法
,
分别测定蜂花
粉
3
种溶剂提取物的
DPPH
清除率
。
1郾 3郾 6摇
·
O
-
清除能力的测定
根据苏晓雨等
[9]
的方法
,
采用邻苯三酚法测定
蜂花粉
3
种溶剂提取物的
·O
-
清除率
。
1郾 3郾 7摇
·
OH
-
清除能力的测定
根据陈晨等
[10]
的方法
,
采用水杨酸法对样品的
·OH
-
清除能力进行测定
。
1郾 3郾 8摇
还原力的测定
根据文献
[11 - 12]
等的方法稍作修改
,
测定样
品的还原力
。
不加样液组吸光度为
A
空白
,
加样液组
吸光度值为
A
样品
。
还原力
= (
A
样品
-
A
空白
)
/ A
空白
。
2摇
结果与分析
2郾 1摇
蜂花粉
3
种溶剂提取物得率
综合多次提取结果
,
得出
:
蜂花粉水提取物的得
率为
54郾 16% ,
甲醇提取物的得率为
46郾 06% ,
三氯
甲烷提取物的得率为
4郾 85% ,
由此可见
,
单从提取
角度考虑
,
水为蜂花粉提取的较佳溶剂
。
2郾 2摇
蜂花粉
3
种溶剂提取物
DPPH
清除能力
目前
,
对抗氧化能力的评价方法有很多
,
但
DPPH
法是一种便捷度强
,
灵敏度高且价格相对便宜的测
定方法
。 DPPH
是有机自由基
,
且很稳定
,
通过加入
抗氧化物质
,
将其由紫色还原成黄色
,
用吸光度的变
化来衡量样品抗氧化能力的强弱
。
图
1
为水
、
甲醇
、
三氯甲烷
3
种溶剂在相同提取条件及相同浓度下测
定的提取物的
DPPH
清除能力
。 3
种溶剂的
DPPH
清除能力均随着溶剂的质量浓度的增大而增大
,
但
甲醇和水提取物在质量浓度高于
4 mg / mL
时
,
清除
率增加有减缓的趋势
;
甲醇提取物的
DPPH
清除能
力明显高于水和三氯甲烷提取物
,
而水和三氯甲烷
提取物之间的
DPPH
清除能力相近
。
以
Vc
做阳性
对照
,
当
Vc
质量浓度为
0郾 03 g / L
时
,DPPH
清除率
达到
94郾 13% ;
甲醇提取物质量浓度为
5 g / L
时
,DP鄄
PH
清除率为
95郾 49% ,
所以在此浓度下两者的
DP鄄
PH
清除能力相近
,
但甲醇蜂花粉提取物的
DPPH
清
除能力远远低于
Vc。
2郾 3摇
蜂花粉
3
种溶剂提取物
·
O
-
清除能力
图
2
为
3
种样品
·O
-
清除能力分析结果
,
由图
2
可知
,3
种样品均有
·O
-
清除能力
,
且清除能力均随
着质量浓度的增大而增加
。
当甲醇提取物的质量浓
度为
0郾 4 ~ 0郾 8 g / L
时
,
其
·O
-
清除能力与其他两种
溶剂差异不显著
;
当甲醇提取物的质量浓度大于
0郾 8 g / L
时
,
其
·O
-
清除能力增加趋势明显高于水提
取物和三氯甲烷提取物
,
且三氯甲烷提取物与水提
55
第
33
卷 第
2
期
摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
吕佳宁等
:
蜂花粉
3
种溶剂提取物的抗氧化性研究
