有限公司提供
。
1郾 1郾 2摇
实验菌株
5
种常见食源性致病菌和
5
种食品中常见益生
菌
,
均保藏于中国工业微生物菌种保藏管理中心
(CICC),
见表
1。
表
1摇
实验菌株
Tab. 1摇 10 kinds of strains in test
菌株名称
菌株来源
肠沙门氏菌肠亚种
(
Salmonella enterica
subsp.
En鄄
terica
)
CICC 21513
出血 性 大 肠 埃 希 氏 菌
(
Escherichia coli
EHEC
O 157: H 7)
CICC 21530
福氏志贺氏菌
(
Shigella flexneri
)
CICC 21534
金黄色葡萄球菌
(
Staphylococcus aureus
)
CICC 21600
铜绿假单胞菌
(
Pseudomonas eruginosa
)
CICC 21636
植物乳杆菌植物亚种
(
Lactobacillus plantarum
sub鄄
sp.
plantarum
)
CICC 6009
嗜热链球菌
(
Streptococcus thermophilus
)
CICC 6035
德氏乳杆菌保加利亚亚种
(
Lactobacillus delbrueckii
subsp.
bulgaricus
)
CICC 6064
婴儿双歧杆菌
(
Bifidobacterium infantis
)
CICC 6069
动物双歧杆菌乳亚种
(
Bifidobacterium animalis
sub鄄
sp.
lactis
)
CICC 21710
1郾 1郾 3摇
培养基
Mueller鄄Hinton
琼脂培养基
(MHA),
乳酸细菌
培养基
(MRS),
营养肉汤琼脂培养基
(NA),
马铃薯
葡萄糖琼脂培养基
(PDA),
麦芽琼脂培养基
(MEA)
均购自中国检验检疫科学研究院北京陆桥技术有限
公司
。
1郾 1郾 4摇
抑菌剂载体
5 mm
直径圆形新华一号定性滤纸片
,
经压力蒸
汽灭菌处理后
,
置
120 益
干燥
2 h,
保存备用
。
1郾 1郾 5摇
厌氧装置
MGC
厌氧培养盒及厌氧产气袋
AnaeroPack
均
购自日本三菱瓦斯化学株式会社
。
1郾 2摇
抑菌能力评价
目前抑菌能力测定的方法有纸片扩散
( Kirby鄄
Bauer, KB)
法
、
最小抑菌浓度
( minimum inhibitory
concentration, MIC)
法
、
抑菌效力检查法等
[3 - 9]
,
实
验参考
《
消毒技术规范
》(2002
版
)
纸片扩散法
[3]
。
1郾 2郾 1摇
培养基的制备
按照实验所需剂量称取
MHA
培养基或
MRS
琼
脂培养基干粉
,
加蒸馏水搅拌
,
加热煮沸至完全溶
解
,121 益
灭菌
20 min,
冷却至
50 益
倾注平板备用
。
1郾 2郾 2摇
实验菌株菌悬液的制备
将
10
株实验菌株分别在适宜的培养基上活化
培养
,
分别蘸取
1 ~ 2
环生长对数期菌体至
1 mL
无
菌
0郾 85%
生理盐水中
,
涡旋振荡
15 s,
用麦氏标准比
浊管校正菌悬液浓度为
0郾 5 McF,
即
5 伊 10
5
~ 5 伊 10
6
CFU / mL。
1郾 2郾 3摇
“
生命营养液
冶
抑菌片的制备
取无菌并干燥的滤纸片
,
每片滴加
30 滋L“
生命
营养液
冶
原液
,
然后将滤纸片平放于清洁的无菌平
皿内
,
置
37 益
温箱烘干备用
。
1郾 2郾 4摇
阴性对照样片的制备
取无菌干燥滤纸片
,
每片滴加无菌蒸馏水
30
滋L,
干燥后备用
。
1郾 2郾 5摇
实验菌的接种
CICC 21513、 CICC 21530、 CICC 21534、 CICC
21600、CICC 21636
接种于
MHA
琼脂培养基
,CICC
6009、 CICC 6035、 CICC 6064、 CICC 6069、 CICC
21710
接种于
MRS
琼脂培养基
,
用无菌棉签蘸取实
验菌株菌悬液
,
平板表面均匀涂抹
3
次
,
每涂抹
1
次
,
平板转动
60 益,
最后将棉签绕平板边缘涂抹
1
周
。
盖好平皿
,
室温干燥
5 min。
1郾 2郾 6摇
“
生命营养液
冶
抑菌剂样片贴放
每个平板贴放
1
片实验样片
,1
片阴性对照样
片
。
用无菌镊子取样片贴放于平板表面
,
样片中心
之间相距
25 mm
以上
,
与平板的周缘相距
15 mm
以
上
。
贴放好后
,
用无菌镊子轻压样片
,
使其紧贴于平
板表面
,
盖好平皿
。
实验重复
3
次
。
1郾 2郾 7摇
培养观察测量
5
种常见致病菌在
MHA
培养基上好氧
37 益
培
养
1 d,5
种常见益生菌在
MRS
培养基上厌氧
37 益
培养
1 ~ 3 d。
用游标卡尺测量抑菌环直径
(
包括
贴片
)
并记录
。
测量抑菌环时
,
应选均匀而完全无
菌生长的抑菌环进行
,
测量其直径应以抑菌环外
沿为界
。
1郾 3摇
菌种分离与纯化
1郾 3郾 1摇
培养基的配制
按照实验所需剂量称取
NA、MRS、PDA、MEA
琼脂
培养基干粉
,
加蒸馏水搅拌
,
同时加热煮沸至完全溶
解
,121 益
灭菌
20 min,
冷却至
50 益
倾注平板备用
。
1郾 3郾 2摇
菌种分离纯化
在无菌条件下
,
称取
25郾 0 mL“
生命营养液
冶,
放
94
第
33
卷 第
2
期
摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
赵
摇
婷等
:
新疆
“
生命营养液
冶
抑菌能力评价及其菌种分离纯化
