9 - 食品科学技术学报页

外重复序列( repetitive extragenic palindromic, REP)
和基因间重复序列 ( enterobacterial repetitive inter鄄
genic consensus sequence, ERIC) . 2004 年 ,Wojciech
等 [36] 对从人 、 猪和狐狸样品分离出的 35 株 Y. en鄄
terocolitica ,分别用 ITS鄄profiling( intergenic transcribed
sequence, ITS)、REP鄄PCR 和 ERIC鄄PCR 三种方法分
型并比较,发现 REP鄄PCR 比另外两种方法的分辨力
高, 从猪中分离的菌株与从人分离的菌株有相同的
基因型,说明人类感染的 Y. enterocolitica 有可能来
自于猪. 同年,Sachdeva 等 [37] 对分离的 81 株 1A 生
物型 Y. enterocolitica 菌株, 用 REP鄄PCR 和 ERIC鄄
PCR 进行分型, 分别可分为 19 和 23 个基因群,其中
大多菌株形成两个基因群 ,说明 Y. enterocolitica 1A
生物型主要由两个克隆群组成, 其中 ERIC鄄PCR 分
辨力更高. 2006 年 ,Falcao 等 [38] 对从人 、 动物和食
品中分离的 Y. enterocolitica 菌株用 PFGE 和 ERIC鄄
PCR 进行分型, 分离株主要为 4 / O:3 生物血清型,
从人和动物分离的 4 / O:3 型菌株基因相似度比从
食品分离的高,PFGE 分辨力比 ERIC鄄PCR 更好. 近
年来本实验室先后建立了阪崎肠杆菌 [39] 、 铜绿假单
胞菌[40] 、 蜡样芽孢杆菌[7] 、 空肠弯曲菌 [41] 等的
ERIC鄄PCR 分型方法 ,2013 年, 在此基础上建立了
Y. enterocolitica 的 ERIC鄄PCR 分型方法,把从食品中
分离的小肠结肠炎耶尔森氏菌进行 ERIC鄄PCR 分子
分型研究,72 个分离株可分为 56 个型共四大簇, 其
中优势菌株主要集中在第三簇. 该方法操作简单、
成本较低、分型效果好, 克服了传统分型方法的不
足, 因此适用于大量的食源性 Y. enterocolitica 的分
型研究,为研究食源性 Y. enterocolitica 的遗传多样
性及其分布规律打下良好的基础 .
2郾 3摇 多位点序列分型
多 位 点 序 列 ( multilocus sequence typing,
MLST) 分型法利用 MLST 对研究菌种的少数几个管
家基因进行等位基因序列分析 , 重复性好、 可标准
化, 核酸序列的数字化存储方式便于通过网络在不
同实验室之间进行传输比对, 目前 MLST 被广泛应
用于多种病原菌的分型和进化. 2005 年 ,Kotetishvili
等 [42] 对耶尔森菌属多个种的细菌使用 16Sr RNA 基
因和其他四个管家基因进行 MLST 分析, 发现鼠疫
耶尔森菌与假结核耶尔森菌具有较近的亲缘关系,
是同一谱系的两个物种,而鲁氏耶尔森菌是和本属
细菌亲缘关系最远的一种 . 2009 年, 王鑫等[43] 用七
个管家基因对 Y. enterocolitica 进行 MLST 分析 , 结
果发现菌株明显的形成了致病性菌株与非致病性菌
株两大类别 ,致病性菌株型别集中, 相同血清型致病
菌呈现出高度的相似性;而非致病性菌株型别分散 ,
没有明显的流行病学关联 , 呈现明显的多态性.
2012 年,Sihvonen 等[44] 对从人临床样本分离的 Y.
enterocolitica 1A 生物型菌株用 16S rRNA 基因和七
个管家基因进行 MLST 分析,MLST 将菌株分成两个
不同谱系, 基因组 1 和基因组 2,其中基因组 1 和致
病性菌株生物血清 4 / O:3 型相似性更高 ,这可能表
明这些 1A 生物型菌株存在潜在致病性. 2014 年 ,
Duan 等 [45] 用 52 株鼠疫耶尔森氏菌 ( Yersinia pes鄄
tis )、762 株假结核耶尔森氏菌 ( Yersinia pseudotuber鄄
culosis ) 和 201 株 Y. enterocolitica 这三种致病性耶尔
森氏菌为研究对象, 用 MLST 研究它们的物种进化
关系,MLST 分析显示这三种耶尔森氏菌分为两个
组 , 第一组为 Y. pestis 和 Y. pseudotuberculosis, Y.
pestis 的主要序列型 ST90 与 Y. pseudotuberculosis 的
ST43 有关联 ,它们只有一个位点的差异,81郾 25% 的
ST43 菌株血清型为 O:1b 型, 支持了 Y. pestis 为血
清型 O:1b 的 Y. pseudotuberculosis 的后裔的观点,第
二组为致病性和非致病性的 Y. enterocolitica, 其中
致病性 Y. enterocolitica 菌株形成了相对保守的一
群 ,另外血清型 O: 3、O: 8 和 O:9 被分成三个不同
的部分 ,而非致病性的菌株则很分散.
3摇 展摇 望
通过 Y. enterocolitica 的生物型、 血清型和毒力
基因可以反映出其致病能力 , 已有研究表明我国致
病性菌株以 3 / O:3 和 2 / O:9 型为主; Y. enterocoliti鄄
ca 1A 生物型可能具有潜在致病性, 携带的 ail 基因
序列不同会具有不同的致病力 ;近年来 ,Y. enteroco鄄
litica 中耐多种抗生素的“ 超级冶 菌株日益普遍, 掌握
它们对抗生素的药敏型别有助于控制其危害 ; 因此
摸索该菌生物型 、血清型和毒力基因之间的联系, 找
出流行的致病菌株, 了解该菌耐药能力的变化,对有
针对性的控制致病菌的危害有重大意义, 下一步我
们将对从食品污染调查中分离出的 Y. enterocolitica
进行毒力基因检测、 生物 / 血清分型, 以了解其致病
性 ;并对分离株进行药敏实验, 确定其耐药性和敏感
4 食品科学技术学报 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2014 年 7 月