荧光
,
但在水溶液中
B1、G1
容易发生荧光淬灭
,
所
以需要采用衍生方法增强荧光信号
。
目前衍生方法
主要有三氟乙酸衍生法
,
碘衍生法等
,
三氟乙酸衍生
法实验步骤复杂
,
重复性差
,
且三氟乙酸毒性很强
,
严重危害身体健康
;
碘衍生法操作复杂
,
受衍生剂影
响很大
,
并且其腐蚀性强
,
容易对仪器造成损
耗
[9 - 10]
。
光化学衍生器内部是一定长度的聚四氟
乙烯管固定于
254 nm
紫外灯照射的不透光的反应
池架里
,
当黄曲霉毒素
B1、G1
流过时
,
受到紫外光
照射后被衍生成荧光性较强的黄曲霉毒素
B2
a
和
G2
a
,
从而提高了检测灵敏度
,
原理见图
1。
因此光
化学衍生器不需要其他化学试剂
,
只是连接到色谱
柱和检测器之间
,
其操作简单
,
重复性好
,
灵敏度高
,
所以本研究采用免疫亲和柱对样品进行净化
、
富集
,
光化学衍生器在线对黄曲霉毒素
B1、G1
衍生
,
液相
色谱法荧光检测器检测样品中黄曲霉毒素
B1,B2,
G1,G2
的含量
[11 - 14]
。
图
1摇
黄曲霉毒素
B1
及
G1
紫外光照射原理图
Fig. 1摇 UV irradiation schematic of AFT B1 and AFT G1
1摇
材料与方法
1郾 1摇
材料与试剂
Inertsil ODS -3
型
(4郾 6 mm 伊 250 mm 伊 5 滋m)
色
谱柱购自岛津公司
;
黄曲霉毒素免疫亲和柱购自
ROMER
公司
;
玻璃纤维滤纸购自
WHATMAN
公司
;
甲醇
、
乙腈均为色谱纯
;
水为
Millipore
过滤水
;
黄曲
霉毒素混合标准品
(1 g / mL)
购自
SUPELCO
公司
。
1郾 2摇
仪器与设备
SIL -20AC
型高效液相色谱仪
,
日本岛津公司
;
Milli -Q
型超纯水仪
,Millipore
公司
; Microfuge
襆
18
型离心机
,
美国
Beckman
公司
;
光化学衍生器
,RO鄄
MER
公司
。
1郾 3摇
方法
1郾 3郾 1摇
标准溶液的制备与标准曲线
以甲醇为溶剂
,
用购买的黄曲霉毒素混合标准
品配制成以下混合标准梯度溶液并做梯度浓度曲
线
:B2
和
G2
梯度浓度分别为
:0,0郾 06,0郾 30,1郾 50,
3郾 00,6郾 00 滋g / L,B1
和
G1
梯度浓度分别为
:0,0郾 2,
1郾 0,5郾 0,10郾 0,20郾 0 滋g / L。
1郾 3郾 2摇
样品的制备
样品粉碎后
,
准确称取
4 g
于
50 mL
离心管中
,
加入
0郾 8 g
氯化钠和
20 mL
准
(
甲醇
) = 30%
的水溶
液
,
混合后振荡提取
15 min,
其后
4 000 r / min
离心
5
min。
取上清
8 mL
并加入
24 mL
水
,
混匀后用纤维
滤纸过滤备用
。
准确移取
20 mL
上述样品提取液
,
以
2 mL / min
流速缓慢通过免疫亲和柱
,
以
20 mL
水
淋洗两次后吹干去除水分
,
准确加入
1 mL
甲醇进行
洗脱
,
收集洗脱液并过滤于上样瓶中准备上样
。
1郾 3郾 3摇
色谱条件
色谱柱
:Inertsil ODS -3 (4郾 6 mm 伊 250 mm 伊 5
滋m);
流动相
:
V
(
水
) 颐
V
(
甲醇
) = 43颐 57;
进样量
10
滋L;
流速
1 mL / min;
柱温
35 益;
检测器是荧光检测
器前连接光化学衍生器
,
激发波长
360 nm,
发射波
长
450 nm。
1郾 3郾 4摇
样品加标回收实验及精密度实验
取阴性对照
6
份
,
精确加入黄曲霉毒素
B1,B2,
G1,G2
的浓度为
10,3,10,3 滋g / kg,
按照
1郾 3郾 2
节制
备
6
份平行样品进行实验检测回收率
。
1郾 3郾 5摇
实际样本的检测
随机选取
16
份由某
5
个公司提供的样品
,
编号为
1 ~16,
按照
1郾 3郾 2
节进行前处理
,
进行上机检测
。
2摇
结果与分析
2郾 1摇 4
种黄曲霉毒素的色谱分析结果
按照本实验方法和色谱条件
,4
种黄曲霉毒素
的色谱分析时间分别为
7郾 1,7郾 8,8郾 9,10郾 1 min,4
种黄曲霉毒素标准溶液的色谱图见图
2(
箭头所指
较高色谱峰为光化学衍生后色谱峰
) 。
在连接光
化学衍生器后
,
黄曲霉毒素
B1
和
G1
峰面积明显
提高
,
分别是原峰面积的
2郾 7
倍和
3郾 6
倍
,
极大地
提高了检测的灵敏度
。
07
食品科学技术学报
摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
摇 2015
年
9
月
