食品科学技术学报 - page 49

别衍生化处理,分析,每个样品做三次平行实验 。 比
较不同的乙醇体积分数下 茁鄄ODAP 及氨基酸的提取
效率,结果见图 1。
图 1摇 乙醇体积分数对 茁鄄ODAP 及其他游离氨基酸
提取效率的影响
Fig. 1摇 Effects of ethanol concentration on extraction yield
of 茁鄄ODAP and other free amino acids
由图 1 可以看出,当 渍( 乙醇)为 10% 时,山黧豆中
的 茁鄄ODAP 与其他游离氨基酸的提取率达到较高。
2郾 3郾 2摇 山黧豆粉质量浓度对 茁鄄ODAP 及氨基酸提
取效率的影响
取 6 支试管,分别加入 1 g 山黧豆粉,渍 ( 乙醇)
为 10% , 按 籽 ( 山黧豆粉 ) 为 0郾 10, 0郾 05, 0郾 03,
0郾 025,0郾 02,0郾 017 g / mL 加入 10 mL 提取溶剂, 在
100 W 功率下超声 1 h,常温静置一晚,在 4 000 r / min 转
速下离心 15 min,取上清提取液, 分别衍生化处理,
分析,每个样品做三次平行实验。 比较不同的山黧
豆粉质量浓度下 茁鄄ODAP 及氨基酸的提取效率, 结
果见图 2。
图 2摇 山黧豆粉质量浓度对 茁鄄ODAP 及其他游离
氨基酸提取效率的影响
Fig. 2摇 Effects of material concentration on extraction yield
of 茁鄄ODAP and other free amino acids
由图 2 可以看出, 当 籽 ( 山黧豆粉) 为 0郾 025
g / mL 时,山黧豆中的 茁鄄ODAP 与其他游离氨基酸的提
取率达到较高,再减小质量浓度,提取率不再变化。
2郾 3郾 3摇 提取温度对 茁鄄ODAP 及氨基酸提取效率的
影响
取 5 支试管,分别加入 1 g 山黧豆粉,渍 ( 乙醇)
为 10% , 按 籽 ( 山黧豆粉) = 0郾 10 g / mL 加入 10 mL
提取溶剂, 在 100 W 功率下超声 1 h, 在水浴温度分
别为 30,40,50,60,70 益 条件下提取 2 h,静置一晚 ,
在 4 000 r / min 转速下离心 15 min,取上清提取液, 分
别衍生化处理, 分析,每个样品做三次平行实验。 比
较不同提取温度下的 茁鄄ODAP 及氨基酸的提取效
率 ,结果见图 3。
图 3摇 提取温度对 茁鄄ODAP 及其他游离氨基酸提取
效率的影响
Fig. 3摇 Effects of extraction temperature on extraction
yield of 茁鄄ODAP and other free amino acids
由图 3 可以看出, 当提取温度为 60 益 时 , 山黧
豆中的 茁鄄ODAP 与其他游离氨基酸的提取率达到较
高 ,再增加提取温度 ,其提取率开始下降。
2郾 4摇 样品定性及定量分析检测
2郾 4郾 1摇 标样及样品图谱分析
茁鄄ODAP 与 17 种氨基酸混合标样的色谱图见
图 4a。 实验确定较佳提取条件为 渍( 乙醇) 为 10% ,
籽( 山黧豆粉) 为 0郾 025 g / mL,提取温度为 60 益。 在
此提取条件下 ,对山黧豆中的 茁鄄ODAP 及其他游离氨
基酸进行 HPLC 分析,见图 4b。 定性分析结果表明山
黧豆中明显含有包括 茁鄄ODAP 在内的 16 种游离氨基
酸,包括 茁鄄ODAP、天冬氨酸、谷氨酸、组氨酸、精氨酸、
丝氨酸、苏氨酸、甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨
酸、亮氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、赖氨酸。 但仍存在未
解决的问题,即天冬氨酸和谷氨酸,苯丙氨酸和异亮氨
酸没有达到完全分离,所以后面定量分析工作中,将未
分开的氨基酸放在一起进行定量分析。
2郾 4郾 2摇 茁鄄ODAP 和 17 种氨基酸标准曲线及结果计算
用 茁鄄ODAP 和 17 种氨基酸的浓度与色谱峰面
积回归得到工作曲线方程 ,见表 1。 实验表明, 在实
验浓度范围内, 呈现很好的线性。 由氨基酸标样与
山黧豆样品的 茁鄄ODAP 及 17 种氨基酸衍生物的
HPLC 色谱图对比可以看出, 山黧豆中明显含有包
括 茁鄄ODAP 在内的 16 种游离氨基酸 。 由标准曲线
求出各种山黧豆中氨基酸的质量比 见表
44 食品科学技术学报 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2015 年 3 月