第 卷 第 期
2015
年
3
月
食 品 科 学 技 术 学 报
Journal of Food Science and Technology
Mar. 2015
doi:10. 3969 / j. issn. 2095鄄6002. 2015. 02. 008
文章编号
:
2095鄄6002(2015)02鄄0042鄄06
引用格式
:
李小波
,
樊琛
,
龙立梅
,
等
.
山黧豆中
茁鄄ODAP
及其他氨基酸的提取和
HPLC
分析
[ J].
食品科学技术学报
,2015,33
(2):42 - 47.
LI Xiaobo, FAN Chen, LONG Limei, et al. Extraction and HPLC analysis of 茁鄄ODAP and other amino acids in
Lathyrus
Sativus
[J]. Journal of Food Science and Technology, 2015,33(2):42 - 47.
山黧豆中
茁鄄ODAP
及其他氨基酸的提取和
HPLC
分析
李小波
1
,
摇
樊
摇
琛
1
,
摇
龙立梅
1
,
摇
李
摇
柰
1
,
摇
曹学丽
1
,
*
,
摇
李雪帆
2
,
摇
牛晓峰
2
,
摇
贾
摇
平
2
(
1.
北京工商大学 食品学院
/
食品添加剂与配料北京高校工程研究中心
/
食品质量与安全北京实验室
,
北京
摇 100048
;
2.
太原六味斋实业有限公司
,
山西 太原
摇 030401
)
摘
摇
要
:
利用氯甲酸对硝基卞酯
(
PNZ鄄Cl
)
作为柱前衍生化试剂
,
建立了山黧豆中神经毒素
茁鄄N鄄
草
酰基
鄄L鄄琢
,
茁鄄
二氨基丙酸
(
茁鄄N鄄oxalyl鄄琢
,
茁鄄diaminopropionic
,
茁鄄ODAP
)
及其他游离氨基酸的同时分析
法
。
HPLC
法为色谱柱
Ultimate XB-C18
,
流动相乙腈和乙酸
-
乙酸钠缓冲溶液
(
pH
值
= 4郾 6
),
梯度
洗脱程序
0 ~ 5 min
渍
(
乙腈
)
25%
,
5 ~ 30 min
渍
(
乙腈
)
25% ~ 90%
,
流速
0郾 8 mL / min
,
柱温
30 益
,
检
测波长
300 nm
。
利用该方法对山黧豆中
茁鄄ODAP
及其他游离氨基酸的提取条件中乙醇体积分数
、
山黧豆粉的质量浓度
(
籽
(
山黧豆粉
))、
提取温度等进行了优化
。
结果表明
,
在
渍
(
乙醇
)
为
10%
,
籽
(
山黧豆粉
)
为
0郾 025 g / mL
,
提取温度为
60 益
时
,
提取效率较高
。
关键词
:
山黧豆
;
茁鄄N鄄
草酰基
鄄L鄄琢
,
茁鄄
二氨基丙酸
;
氨基酸
中图分类号
:
TS207郾 3摇 摇 摇 摇 摇
文献标志码
:
A
收稿日期
: 2014 09 12
基金项目
:
农业部公益性行业
(
农业
)
科研专项
(201303069-04);
北京工商大学研究生科研学术创新基金项目
。
作者简介
:
李小波
,
女
,
硕士研究生
,
研究方向为生物分离工程
;
*
曹学丽
,
女
,
教授
,
博士
,
主要从事生物分离和分析方面的研究
。
通信作者
。
摇 摇
山黧豆
(
Lathyrus sativus
Linn. ),
又名马牙豆
、
家
山黧豆
、
山棱豆
、
栽培香豌豆
,
木兰纲
(Magnoliopsi鄄
da)
蔷薇亚纲
( Rosidae)
豆目
( Fabales)
蝶形花科
(Fabaceae)
野豌豆族
( Trib. Vicieae)
山黧豆属
(
La鄄
thyrus
),
一年生作物
[1 - 3]
。
由于其具有耐寒
、
抗旱
、
抗虫害
、
固氮肥沃土壤以及低成本高产的特性
,
在我
国东北
、
西北
、
华北等地区大面积种植
[4]
。
山黧豆
籽实中含有丰富的蛋白质和氨基酸
,
但也含有一种
非蛋白质氨基酸
,
这种氨基酸含两种同分异构体
,
一
种是
茁鄄N鄄
草酰基
鄄L鄄琢,茁鄄
二氨基丙酸
(茁鄄N鄄oxalyl鄄琢,
茁鄄diaminopropionic,茁鄄ODAP),
是一种神经毒素
,
长
期食用可引起下肢瘫痪
,
称为山黧豆中毒
[5 - 8]
,
由于
这种氨基酸的存在妨碍了山黧豆的推广和种植
;
另
一种是
琢鄄N鄄
草酰基
鄄L鄄琢,茁鄄
二氨基丙
(琢鄄N鄄oxalyl鄄琢,
茁鄄diaminopropionic,琢鄄ODAP),
无毒性
[9 - 10]
。
研究报
道
,茁鄄ODAP
在种子中的含量变异很大
,
所以人们一
直致力于选育低毒或无毒品种
,
因而神经毒素
茁鄄
ODAP
含量分析方法颇受关注
[11]
。
鉴于此
,
本工作
拟利用
茁鄄ODAP
与其他游离氨基酸性质相近的特
点
,
应用柱前衍生化高效液相色谱
-
紫外检测法
(HPLC鄄UV)
进行定性和定量分析
,
为山黧豆这一新
型食物资源的进一步研究开发提供实验依据
。
1摇
材料与方法
1郾 1摇
材料与试剂
山黧豆
,
山西太原六味斋实业有限公司
; 茁鄄
ODAP
标样
(
纯度
> 98% ),
成都瑞芬思生物科技有
限公司
;
氨基酸混合标样
(
纯度
> 99% )
和对硝基氯
甲酸苄酯
(4鄄nitrobenzyl chloroformate,PNZ鄄Cl),
美国
Sigma
公司
;
甲醇
、
乙腈均为色谱纯
。
1郾 2摇
仪器与设备
Agilent 1100
型高效液相色谱系统
(
配有可变波
24
