62 - 食品科学技术学报页
基本HTML版本
乙醇
(
分析纯
)
购于北京化工厂
;
芦丁标准品
(
色谱
纯
)、
槲皮素标准品
(
色谱纯
),SIGMA
公司
;
甲醇
(
色
谱纯
)、
乙腈
(
色谱纯
)、
乙酸
(
色谱纯
), Fisher
公司
.
1郾 3摇
仪器
TB鄄214
型电子天平
,
北京赛多利斯仪器系统有
限公司
;RJ鄄TDL鄄5A
型低速大容量离心机
,
无锡市瑞
江分析仪器有限公司
;DK鄄98鄄1
型电热恒温水浴锅
,
天津市泰斯特仪器有限公司
;T6
新世纪型紫外可见
分光光度计
,
北京普析通用仪器有限公司
;SHZ鄄芋
型循环水真空泵及
RE鄄52AA
型旋转蒸发器
,
上海亚
荣生化仪器厂
;pHS鄄3D
型
pH
计
,
上海三信仪表厂
;
YS鄄04
型小型高速粉碎机
,
北京燕山正德机械设备
有限公司
;Agilent 1260
型高效液相色谱仪
(
配有四
元梯度泵
、
自动进样器
、
二极管阵列检测器
、Chem
Station
色谱工作站等
),Agilent ZORBAX SB鄄C
18
柱
(250 mm 伊 4郾 6 mm, 5 滋m),
美国安捷伦科技有限公
司
;
大孔树脂吸附层析柱系统
(
层析柱
:1郾 6 cm 伊 30
cm,DHL鄄A
型电脑恒流泵
,DBS鄄100
型电脑全自动
部分收集器
),
上海沪西仪器厂有限公司
.
2摇
实验方法
2郾 1摇
沙棘黄酮的测定方法
2郾 1郾 1摇
紫外分光度测定
以芦丁为对照品
,
在
510 nm
下采用
Al
3 +
显色法
测定黄酮含量
[11]
.
1)
标准曲线绘制
.
准确称取标准品后逐级稀释
至不同浓度
,
测定不同质量浓度芦丁标准液
,
以吸光
度
y
为纵坐标
,
质量浓度
x
为横坐标
(mg / mL)
绘制
标准曲线
,
得到回归方程
y
= 11郾 314
x
- 0郾 000 6,
R
2
= 0郾 999 4.
2)
样品黄酮含量测定
.
取适量样品提取液
,
稀
释后
,
根据回归方程计算提取液中黄酮含量
.
2郾 1郾 2摇
高效液相测定
据文献
[12]
报道
,
沙棘黄酮中主要含有儿茶
素
、
芦丁
、
槲皮素
、
山柰酚
、
异鼠李素
5
种活性物质
,
但根据实验需要
,
只选取芦丁
、
槲皮素两种标准品进
行液相分析
,
见图
1.
HPLC
检测方法是
Agilent ZORBAX SB鄄C
18
柱
(250 mm 伊4郾 6 mm, 5 滋m),
流速
1 mL / min,
柱温
25 益,
流动相
A
为含有体积分数
0郾 5%
乙酸的甲醇和乙腈
混合液
(40 颐 15,
V / V
),
流动相
B
为体积分数
0郾 5%
乙酸的超纯水
,
检测波长
279 nm,
梯度洗脱如表
1.
图
1摇
两种标准品
HPLC
Fig. 1摇 HPLC of two standard products
摇
表
1摇
高效液相梯度洗脱
Tab. 1摇 HPLC gradient elution
序号
t
/ min
准
(A) / %
准
(B) / %
1
0
30郾 00
70郾 00
2
4郾 00
30郾 00
70郾 00
3
6郾 00
55郾 00
45郾 00
4
20郾 00
60郾 00
40郾 00
5
30郾 00
70郾 00
30郾 00
摇 摇
图
1
中
1
号峰为芦丁
,
出峰时间为
10郾 087 min;
2
号峰为槲皮素
,
出峰时间为
15郾 189 min.
根据文献
[13]
所述方法
,
精密称取对照品
,
以不同浓度分别
上样
,
然后以质量浓度
x
(mg / mL)
为横坐标
,
峰面积
y
为纵坐标
,
计算回归方程
.
芦丁的标准曲线为
y
=
17 891
x
- 28157,
R
2
= 0郾 999 4;
槲皮素标准曲线为
y
= 41 046
x
- 55718,
R
2
= 0郾 999 2,
见图
2.
2郾 2摇
热水碱提
取一定量干燥沙棘叶
,
粉碎过
50
目筛
.
称量
25郾 0 g
沙棘叶粉
,
按实验计划溶解
,
并用
1郾 0 mol / L
的
NaOH
溶液和
1郾 0 mol / L
磷酸溶液调节
pH
值
,
控
制反应温度及反应时间
,
抽滤后用分光光度计测定
.
2郾 2郾 1摇
单因素实验
各因素水平设置为
pH
值
:4郾 0,6郾 0,8郾 0,10郾 0,
12郾 0;
温度
:50,60,70,80,90 益;
时间
:0,0郾 5,1郾 0,
1郾 5,2郾 0,2郾 5,3郾 0 h;
质量浓度
:50郾 0,40郾 0,33郾 3,
28郾 6,25郾 0 mg / mL.
2郾 2郾 2摇
响应面试验
根据单因素实验结果
,
采用响应面设计
,
利用
Design鄄Expert 7郾 1郾 6
软件进行
Box鄄Behnken
设计和
实验处理
,
以确定较优工艺条件
[14 - 16]
.
选择对黄酮
浸提率有显著影响的
3
个因素
:pH
值
,
温度
,
质量浓
度
,
进行
3
因素
3
水平响应面分析试验
,
因素水平及
编码见表
2.
75
第
32
卷 第
4
期
摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
李
摇
柰等
:
沙棘叶中黄酮提取及大孔树脂分离纯化槲皮素
