63 - 食品科学技术学报页

图 2摇 高效液相标准曲线
Fig. 2摇 HPLC standard curves
表 2摇 响应面三因素三水平实验设计
Tab. 2摇 Factors and levels of response surface analysis
水平
因素
pH 值 温度 / 益 质量浓度 / (mg·mL -1 )
- 1 8郾 0 60 40郾 0
0 10郾 0 70 33郾 3
1 12郾 0 80 28郾 6
2郾 3摇 大孔树脂纯化研究
将热碱水提取液过滤后用 1郾 0 mol / L 的磷酸中
和至 pH 值为 7郾 0, 离心集沉淀,沉淀物溶解后再次
调至中性,然后作为上样液进行纯化.
2郾 3郾 1摇 静态吸附和解吸实验
2郾 3郾 1郾 1摇 树脂选择
根据文献 [17 - 19] 选取树脂 AB鄄8、 DM301、
HPD鄄100 对样品中沙棘黄酮进行静态吸附、 解吸.
在 50 mL 1 mg / mL 的上样液中加入 5郾 00 g 树脂, 放
入 25 益 恒温水浴摇床中振荡, 在不同时间 1郾 0,
2郾 0,3郾 0,4郾 0,5郾 0 h 取样 . 利用分光光度法计算树
脂吸附值.
吸附值 =
吸附前溶液浓度 - 吸附后溶液浓度
树脂质量 伊 溶液体积.
树脂吸附饱和后,用去离子水洗涤, 再用 50 mL
体积分数为 70% 的乙醇在 25 益 恒温水浴摇床中解
吸. 在不同时间 0郾 5,1郾 0,1郾 5,2郾 0,3郾 0 h 取样 . 利
用分光光度法计算树脂的解吸率 .
解吸率 = 解吸液浓度 伊 解吸液体积
树脂质量 伊 吸附值 伊 100% .
2郾 3郾 1郾 2摇 单因素实验
选取树脂 AB鄄8 进行如下各单因素实验: 上样
液 pH 值分别调至 4郾 0,5郾 0,6郾 0,7郾 0,8郾 0; 上样液质
量浓度分别为 0郾 2,0郾 5,1郾 0,2郾 0,3郾 0 mg / mL; 洗脱
液分别为体积分数 40%,50%,60%,70%,80% 的乙醇.
利用分光光度法计算树脂的吸附值及解吸率 .
2郾 3郾 2摇 动态吸附 / 解吸实验
将 35 g 树脂 AB鄄8 装于层析柱(1郾 6 cm 伊 30 cm,
柱体积 100 mL) 中, 平衡后采用 1郾 0 mg / mL pH 值为
6郾 0 的上样液进行吸附 , 流速 1郾 0 mL / min, 上样量
150 mL,用收集器收集流出液(10 min / 管),并用分光光
度法测定每管流出液浓度,计算最适上样量. 吸附完毕
后用 3 倍柱体积的去离子水以 2 mL / min 洗涤,最后再
分别用体积分数 30%,50%,70%,80%,90% 乙醇进行
梯度洗脱, 流速 1郾 0 mL / min,每个浓度分别洗脱 100
mL,收集洗脱液,采用 HPLC 方法进行测定.
3摇 结果与分析
3郾 1摇 热水碱提条件确定
3郾 1郾 1摇 提取单因素优化
不同 pH 值 、 温度、 时间、 质量浓度等因素的单
因素条件对沙棘黄酮提取率的影响见图 3. 由图 3
可知 ,pH 值的增加使得沙棘黄酮的产率不断上升,
但 pH 值过大后黄酮会被破坏, 产率降低,所以较佳
pH 值为 10郾 0;在温度的单因素实验中 ,总黄酮产率
随温度的提高呈上升趋势 ,这是因为温度升高,加快
了分子的扩散能力 [20] ,但当温度达 70 益 后 ,产率随
温度的上升而不再改变 , 所以较佳提取温度为 70
益;提取时间测定中 ,当低于 2郾 0 h 时总黄酮产率随
时间增加而增大 ,当提取时间大于 2郾 0 h 后, 总黄酮
产率随时间变化的趋势减缓 , 所以选择适宜提取时
间为 2郾 0 h; 最后在质量浓度实验中, 当质量浓度大
于 33郾 3 mg / mL 后 , 总黄酮产率趋势随质量浓度增
加而变缓, 即当质量浓度达到一定程度时,即使再增
大质量浓度,产率也趋于稳定,此时溶剂已将有效成分
基本完全溶出,所以适宜质量浓度为 33郾 3 mg / mL.
85 食品科学技术学报 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2014 年 7 月