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4 4                                     食品科学技术学报摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇     摇 2018 年 3 月


   心 10 min,取上清液平分成 9 份,量其体积,计算硫                     1郾 3郾 6郾 3摇 金属离子对酶活性的影响
   酸铵在 10% ~ 90% 饱和度下的质量。 称取不同质                          取质量分数为 1% 的纯酶液 1 mL,分别加入浓
   量的硫酸铵,涡旋搅拌缓慢加入,搅拌 20 min 后于 4                     度为 1、5、10 mmol/ L 的硫酸锰、氯化钙、硫酸镁、硫
   益静置 4 h。 沉淀后,在 4 益以 10 000 r/ min 离心 10           酸铜、氯化锌和硫酸亚铁溶液中,室温保存 30 min,
   min,取上清液测定酶活力,空白组只添加磷酸盐缓                          测定酶活。

   冲液。                                               1郾 3郾 6郾 4摇 抑制剂对酶活性的影响
   1郾 3郾 5郾 2摇 硫酸铵沉淀                                     取 1 mL 酶液分别加入相同浓度的 SDS、半乳
       由分级沉淀可得纯化乳糖酶的最佳硫酸铵饱和                          糖、葡萄糖、EDTA 1 mL,室温保存 30 min 后,取 1 mL
   度范围。 先取粗酶液量其体积,计算并称取该体积                           溶液,测定相对酶活。
   范围内上限和下限饱和度对应的硫酸铵质量。 缓慢                           1郾 3郾 6郾 5摇 底物浓度对酶活性的影响

   加入范围下限质量的硫酸铵于酶液中,搅拌 20 min                            分别 配 制 浓 度 为 0郾 5、 1郾 0、 1郾 5、 2郾 0、 2郾 5、 3
   后于 4 益 静置 2 h。 在 4 益 以 10 000 r/ min 离心 10        mmol/ L ONPG 溶液,取 1 mL 酶液,测定相对酶活。
   min,取上清液,缓慢加入范围上限质量的硫酸铵,搅                         1郾 4摇 实验统计
   拌 20 min 后于 4 益静置 2 h。 在 4 益以 10 000 r/ min           实验数据采用三平行实验取平均值,通过 SPSS
   离心 10 min,弃上清,用 20 mL 磷酸盐缓冲溶液溶解                   19郾 0 数据分析软件处理方差,当 p < 0郾 05 时差异显
   沉淀,于 4 益保存      [13 - 14] 。                       著,当 p > 0郾 05 时,差异不显著。
   1郾 3郾 5郾 3摇 DEAE鄄SepHarose Fast Flow 离子交换柱
       冷冻干燥后的酶粉末,配制成 0郾 5 mg / mL 的                  2摇 结果与分析
   溶液。 使用 DEAE鄄SepHarose Fast Flow 离子交换
                                                     2郾 1摇 ONP 标准曲线
   柱(2郾 6 cm 伊 30 cm) 对粗酶液进行纯化,上样量为
                                                         ONP 标 准 曲 线 如 图 1, 其 中 y = 0郾 018x -
   10 mL,流速为 1郾 5 mL / min,溶剂为 pH 值为 7 的磷
                                                              2
                                                     0郾 0836,R = 0郾 006 2。
   酸盐缓冲液。 先用缓冲液洗脱 50 min,然后用分别
   含有 0郾 1、0郾 5、0郾 9 mol 的 NaCl 的磷酸盐缓冲液梯
   度洗脱。 收集峰值附近的洗脱液,透析后冷冻干
   燥  [5]  。
   1郾 3郾 5郾 4摇 SepHadex G75 纯化乳糖酶
       将 1郾 3郾 5郾 3 中得到的酶粉末配制成 0郾 5 mg / mL
   的溶液,经 SepHadex G75 柱子(2郾 6 cm 伊 60 cm) 对

   酶液进行纯化。 上样量为 10 mL,流速为 1郾 5 mL/ min,                             图 1摇 ONP 标准曲线
   溶剂为 0郾 09 mol/ L 的磷酸盐缓冲液,收集峰值附近                               Fig. 1摇 Standard curves of ONP
   的蛋白冷冻干燥        [15] 。                             2郾 2摇 单因素实验测定影响乳糖酶产量因素
   1郾 3郾 6摇 酶学特性研究                                   2郾 2郾 1摇 不同碳源对菌株产酶的影响
   1郾 3郾 6郾 1摇 温度对乳糖酶活性及稳定性的影响              [16]         不同碳源时菌株产乳糖酶的活性如图 2。 从图
       取 5 支试管,分别加入质量分数为 1% 的纯酶                      2 可以看出,5 种不同碳源的培养基中 st. GST鄄6 产
   液 1 mL,45 益保温 10 min,30、40、50、60、70 益 预热          乳糖酶活性存在显著性差异。 其中乳糖对菌株产酶

   10 min 后,测定相对酶活。                                  的促进作用最大,其活性为 88郾 9 U/ mL。 原始配方
       取 5 支试管,分别加入质量分数为 1% 的纯酶                      中乳糖和葡萄糖共同为碳源的作用次之,故乳糖参
   液 1 mL,分别在 25、35、45、55、65 益下保温,2 h 后测             与时会促进菌株产酶。
   定相对酶活。                                            2郾 2郾 2摇 不同乳糖浓度对菌株产酶的影响
   1郾 3郾 6郾 2摇 pH 值对乳糖酶活性及稳定性的影响                         选取菌株产乳糖酶的重要碳源即乳糖作为研究
       取 5 支试管分别加入质量分数为 1% 的纯酶液                      对象,不同乳糖浓度时菌株产乳糖酶的总活性如图
   1 mL,用 pH 值分别为 3、4、5、6、7、8 的磷酸盐缓冲                 3。 从图 3 中可以看出,当乳糖质量浓度为 15 g / mL
   液配制 ONPG 溶液,测定相对酶活。                               时,对菌株产乳糖酶的促进作用最大, 酶活性为
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