Page 37 - 《食品科学技术学报》2020年第5期
P. 37

3 2                                     食品科学技术学报摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇     摇 2020 年 9 月


   化剂  [1 - 3]  。 壳寡糖(chitooligosaccharide, COS) 是由  拟对其反应条件、产率、取代度、分子量、多分散性指
   D鄄氨基葡萄糖(或少量 N鄄乙酰鄄D鄄氨基葡萄糖)通过                       数、水溶性、酸稳定性、体外细胞毒性、zeta 电位、抗
   茁鄄1,4鄄糖苷键连接而成的一种低聚糖,是含量仅次                         氧化活性和动物毒性进行系统评价。 希望为合理利
   于纤维素的第二大天然生物多糖。 壳寡糖具有优良                           用壳寡糖这种可再生资源提供理论参考。
   的抗菌性、生物无毒性、可自然降解性以及良好的生
   物相容性等特点        [4 - 6] ,在食品、医药和农业等多个领             1摇 材料与方法
   域得到了广泛应用         [7 - 9] 。 但由于壳寡糖抗氧化能力
                                                     1郾 1摇 材料与试剂
   较传统抗氧化剂如丁基羟基茴香醚(BHA)和丁基羟
                                                         曲酸,分析纯,武汉伟盛生物有限公司;壳寡糖,
   基甲苯(BHT)相对较低,因此限制了其在食品行业的
                                                     脱乙酰度 90% ,相对分子质量 8郾 828 kDa,浙江金壳
   进一步应用      [10] 。 壳寡糖的分子链中有 3 个活性位
   点,分别是 C2 位的伯胺、C6 位的伯羟基和 C3 位的仲                    药业有限公司; 壳寡 糖 - O - 曲酸聚合物, 自制。
                                                     3鄄乙基苯并噻唑啉鄄6鄄磺酸(ABTS),购自美国霍尼韦
   羟基,这是对其进行结构修饰的良好活性位点                    [11 - 12]  。
       近年来,已有越来越多的研究人员致力于具有                          尔国际有限公司。 硝基蓝四唑(NBT) 和 2,2鄄二苯鄄
                                                     1鄄苦基肼(DPPH) 购自德国 Sigma鄄Aldrich 公司。 人
   良好生物相容性、安全无毒的新型壳寡糖衍生物的
                                                     主动脉平滑肌细胞(HASMC CC -2571),购自赛奇
   制备和应用研究。 Sun 等         [13]  通过控制化学反应过
                                                     生物工程有限公司。 核黄素、蛋氨酸、Tris鄄HCl 缓冲
   程中二羟乙酸的用量,分别制备出一种具有良好的
                                                     溶液、N鄄甲基哌嗪、苯甲醛、吡啶、铁氰化钾、乙二胺
   水溶性、低毒性和抗氧化性的羧甲基壳寡糖衍生物
                                                     四乙 酸 ( EDTA)、 二 甲 亚 砜 ( DMSO)、 亚 硫 酰 氯
   和 3 种不同取代度的 N鄄羧甲基壳寡糖衍生物,结果
   显示,具有较低取代度的衍生物清除自由基的能力                            (SOCl )、磷酸盐等化学试剂,购于国药有限公司。
                                                           2
   最强。 Liu 等   [6]  将具有抗菌活性的曲酸基团,通过                  健康的昆明系雌性小鼠[6 ~ 8 周,(20郾 0 依 2郾 0) g,
   接枝反应与壳寡糖的活性基团进行反应,得到了一                            40 只],购于斯贝福(北京)实验动物科技有限公司,
   系列具有良好生物相容性和安全无毒的衍生物。 在                           实验动物生产许可证号:SCXK(京)2019鄄0010。 其
   壳寡糖的活性位点上可以通过接枝反应                   [14] 、季铵盐     余试剂均为国产分析纯。
   反应  [15]  、羧甲基反应等    [16]  合成出多种衍生物。 然            1郾 2摇 仪器与设备
   而,目前报道的一些壳寡糖烷基化反应产物的生物                                DK-8AXX 型水浴锅,上海一恒科技有限公司;
   选择性较低,因而存在产物的生物相容性差、细胞毒                           SPX 型 智 能 生 化 培 养 箱, 南 京 实 验 仪 器 厂;
   性和溶血活性高等问题             [17 - 18] 。 曲酸 ( kojic acid,  D8Advance 型 X鄄射线结晶衍射仪,德国布鲁克 AXS
   KA),化学名称为 2鄄羟甲基鄄5鄄羟基鄄1,4鄄吡喃酮,是                    有限公司;UV-1000 型紫外-可见分光光度计,上海
   由一些微生物如曲霉属真菌(Aspergillus)、醋杆菌属                    天美科学仪器有限公司;F -7000 型荧光光谱仪,日
   (Acetobacter)和青霉菌属( Penicillium) 等经过好氧            本日立公司;Nexu S470 型傅立叶变换红外光谱仪,
   发酵产生的一种常见的弱酸性代谢产物                    [19 - 20] 。 由  美 国 Nicolet Instrument Thermo 公 司; TGA/ SD鄄
   于其特有的类似苯邻二酚的结构,曲酸具有抗菌、抗                           TA851e 型热分析系统,梅特勒-托利多仪器有限公
   病毒、抗发炎、抗肿瘤、抗氧化             [21]  等作用,并且具有         司;AV400 型核磁共振波谱仪,德国 Brucker 公司。
   安全无毒,pH 值适用范围广、热稳定性好、受热不易                         1郾 3摇 实验方法
   分解、对人体无刺激和食用安全等优点。 日本早在                           1郾 3郾 1摇 COS -O-KA 的制备
   1988 年 就 批 准 曲 酸 作 为 食 品 和 医 药 添 加 剂 使                参照 Liu 等   [24] 的方法制备出氯代曲酸;将一定
   用  [21] 。 氯代曲酸作为曲酸的衍生物之一,具有良好                     量的壳寡糖溶解于 70 mL 体积分数为 1% 的醋酸溶
   的抗氧化活性的同时,还是良好的亲核、亲电取代的                           液中,再加入 120 mL 的甲醇,搅拌均匀,在 60 益 下
   配体,并已被广泛应用于食品、医疗、化妆品和化学                           缓慢加入苯甲醛和甲醇的混合液,调节 pH 值为
   工业等领域      [22 - 23] 。                            7郾 0,抽滤,收集沉淀,用无水乙醇索氏提取 12 h,真
       基于本课题组前期的研究,并受壳寡糖和曲酸                          空干燥,研磨后得粉末,即得到壳寡糖希夫碱;将一
   的结构及其功能特性的启发,本研究设计了一种制                            定量的氯代曲酸和壳寡糖希夫碱分别溶解于 50 mL
   备壳寡糖-O-曲酸聚合物(COS -O-KA)的方法                 [7] ,  的二甲基甲酰胺中后,加入一定量的吡啶,搅拌反应
   32   33   34   35   36   37   38   39   40   41   42