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第 36 卷 第 2 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 李顺峰等: 香菇柄中 5忆鄄核苷酸的酶法提取及组成分析 5 3

发提供参考。 1郾 2郾 3郾 1摇 色谱条件
HPLC 为 美 国 戴 安 Ultimate 3000, 配 有 PDA鄄
1摇 材料与方法 3000 检测器;色谱柱为安捷伦 ZORBAX Eclipse Plus

-1
C 色谱柱(5 滋m,4郾 6 伊250 mm);流动相为 0郾 2 mol·L
1郾 1摇 材料与试剂 18
磷酸二氢钾颐 水 = 30颐 70;检测波长为 254 nm;进样
香菇柄,购自郑州信基调味品城;纤维素酶(食
量 10 滋L;柱温 30 益;流速 1郾 0 mL·min - 1 。
- 1
品级,10 000 U·g ),南宁庞博生物工程有限公司;
1郾 2郾 3郾 2摇 标品及混合标品的配制
磷酸二氢钾、高碘酸钠、乙二醇、抗坏血酸、四水合钼
准确称取 5忆鄄GMP、5忆鄄UMP、5忆鄄CMP、5忆鄄AMP、5忆鄄
酸铵等均为国产分析纯;5忆鄄鸟苷酸(5忆鄄GMP)、5忆鄄尿
IMP、5忆鄄XMP 各 0郾 100 g, 用超纯水溶解后配成 1
苷酸(5忆鄄UMP)、5忆鄄胞苷酸(5忆鄄CMP)、5忆鄄腺苷酸(5忆鄄
- 1
mg·mL 各核苷酸标准液。 取核苷酸标准液各 1
AMP)、5忆鄄肌苷酸 (5忆鄄IMP), 购自 Sigma鄄Aldrich 公
mL,定容至 10 mL,得 6 混标溶液,各单核苷酸质量
司;5忆鄄黄苷酸(5忆鄄XMP),购自上海阿拉丁生化科技
- 1
浓度为 100 滋g·mL , 并 依 次 配 成 70、50、30、10
股份有限公司;实验用水为蒸馏水。
- 1
滋g·mL 核苷酸混合标准液,分别吸取 10 滋L 测定,
1郾 2摇 实验方法
依据峰面积绘制各 5忆鄄核苷酸标准曲线。
1郾 2郾 1摇 纤 维 素 酶 酶 解 提 取 香 菇 柄 中 5忆鄄核 苷 酸
1郾 2郾 3郾 3摇 香菇柄 5忆鄄核苷酸组成测定
单因素实验
纤维素酶酶解提取得到的香菇柄 5忆鄄核苷酸过
香菇柄 40 益烘干后,粉碎过 60 目筛,称取香菇
0郾 2 滋m 滤膜,取 10 滋L 上样测定,并依据保留时间
柄粉 2郾 0 g,分别考察纤维素酶不同加酶量(0郾 1% 、
确定各 5忆鄄核苷酸,然后按峰面积计算各 5忆鄄核苷酸
0郾 2% 、0郾 4% 、0郾 6% 、0郾 8% 、1郾 0% )、液固比(mL颐 g)
含量。
(10颐 1、20颐 1、30颐 1、40颐 1、50颐 1)、酶解温度(30、40、
50、60、70 益)、酶解时间(0郾 5、1、2、3、4、5 h)、酶解
2摇 结果与分析
pH 值(3郾 0、3郾 8、4郾 6、5郾 4、6郾 2、7郾 0) 对香菇柄中 5忆鄄
核苷酸提取得率的影响。 采用过碘酸氧化法 [18] 测 2郾 1摇 单因素实验
定 5忆鄄核苷酸,每组实验重复 3 次,取平均值。 2郾 1郾 1摇 加酶量对 5忆鄄核苷酸得率的影响
1郾 2郾 2摇 纤维素酶酶解提取香菇柄中 5忆鄄核苷酸正交 在液固比为 20颐 1,酶解温度为 50 益,酶解时间
试验设计 为 2 h,酶解 pH 值为 5郾 4 的条件下,采用不同加酶量
在单因素实验的基础上,选取加酶量、酶解温 (0郾 1% 、0郾 2% 、0郾 4% 、0郾 6% 、0郾 8% 、1郾 0% ) 进行酶
度、酶解 pH 值、酶解时间 4 个因素,采用 L (3 ) 正 解提取,考察加酶量对香菇柄中 5忆鄄核苷酸提取得率
4
9
交设计对纤维素酶酶解提取 5忆鄄核苷酸工艺进行优 的影响。 加酶量对 5忆鄄核苷酸得率的影响见图 1。
化。 正交试验设计与水平见表 1。
表 1摇 正交因素水平
Tab. 1摇 Factor levels of orthogonal test
因素
水平 A B C D
加酶量/ % 酶解温度/ 益 酶解 pH 值 酶解时间 / h
1 0郾 4 30 3郾 8 3
2 0郾 6 40 4郾 6 4
3 0郾 8 50 5郾 4 5
图 1摇 加酶量对 5忆鄄核苷酸得率的影响
1郾 2郾 3摇 纤维素酶酶解提取香菇柄中 5忆鄄核苷酸的 Fig. 1摇 Effect of cellulase amount on
组成分析 5忆鄄nucleotides content
摇
5忆鄄核苷酸的组成测定参考 Taylor 等 [19] 和 Mau 从图 1 可以看出,在加酶量为 0郾 1% ~ 0郾 6%
等 [20] 方法并稍作修改。 时,随着加酶量的增大,5忆鄄核苷酸得率呈逐渐增大