81 - 食品科学技术学报页

冷冻干燥箱 , 德国 CHRIST 公司 ;KQ-400DB 型数
控超声波清洗器, 昆山市超声仪器有限公司 ;Ep鄄
pendorf5810R 型高速冷冻离心机 , 德国 Eppendorf
公司 .
1郾 2摇 色谱分析条件的建立
通过对流动相组成 、流速 、进样量的优化[9] , 最
终得到桔霉素的液相色谱检测条件. 色谱柱采用岛
津 ODS 柱 (WondaSil C18 150 伊 4郾 6 mm,5 滋m);流动
相摇 V( 乙腈)与 V(水)( 含 0郾 03% 磷酸) 之比 45颐 55;流
速为 1郾 0 mL / min;柱温为 28 益;进样量为 10 滋L;检测
器为荧光检测器;检测波长:姿ex =331 nm,姿em =500 nm.
1郾 3摇 标准溶液的配制
取桔霉素标准品 1郾 00 mg, 用甲醇溶解并稀释
定容至 10 mL,配置成 100 mg / L 的储备溶液 ,于 4 益
冰箱避光保存备用. 临用时, 用甲醇分别稀释为
1 000,500,200,50,20,0郾 5 滋g / L 的桔霉素标准溶
液, 备用.
1郾 4摇 单因素实验
1郾 4郾 1摇 提取剂对提取率的影响实验
根据文献中对提取剂的研究[10 - 11] , 选择不同配
比的甲苯、 乙酸乙酯、 甲酸系列复合萃取剂 ( 简称
TEF) 研究其对红腐乳中桔霉素的提取效率. 将冷
冻干燥后的腐乳样品粉碎,过 40 目筛 , 保存于干燥
器内,随用随取. 称取 1郾 00 g 干腐乳, 准确加入 25
mL 提取剂,50 益 超声提取 30 min,8 000 r / min,离心
10 min, 取 2 mL 浓缩至干,加入 1 mL 甲醇溶解, 用孔
径为 0郾 45 滋m 的有机膜微滤后进行 HPLC 分析. 每
组实验做 3 组平行 .
1郾 4郾 2摇 料液比对提取率的影响实验
称取 1郾 00 g 干腐乳 , 分别准确加入体积比为
1颐 9颐 1 的 TEF 提取剂, 使料液比 ( g / mL) 为 1 颐 5,1 颐
10,1颐 15,1颐 20,1颐 25,1颐 30,1颐 35,1颐 40,50 益 超声提
取 30 min,8 000 r / min, 离心 10 min, 取 2 mL 浓缩至
干, 加入 1 mL 甲醇溶解 ,用孔径为 0郾 45 滋m 的有机
膜微滤后进行 HPLC 分析. 每组实验做 3 组平行.
1郾 4郾 3摇 提取温度对提取率的影响实验
称取 1郾 00 g 干腐乳,准确加入 15 mL 体积比 1颐 9颐 1
的 TEF 提取剂,超声提取 30 min,温度分别设定为 30,
40,50,60,70 益,8 000 r / min,离心 10 min,取 2 mL 浓缩
至干,加入 1 mL 甲醇溶解,用孔径为 0郾 45 滋m 的有机膜
微滤后进行 HPLC 分析. 每组实验做 3 组平行.
1郾 4郾 4摇 提取时间与次数对提取率的影响实验
称取 1郾 00 g 干腐乳,准确加入 15 mL 体积比为
1颐 9颐 1的 TEF 提取剂,60 益 超声提取 10 min, 连续提
取 4 次 ,将 4 次提取液分别离心,取 2 mL 浓缩至干,
加入 1 mL 甲醇溶解,用孔径为 0郾 45 滋m 的有机膜微
滤后进行 HPLC 分析. 每组实验做 3 组平行 .
1郾 5摇 样品加标回收实验
称取 9 份已知桔霉素含量的红腐乳冻干样品各
1 g,分成 3 组 ,分别向每组中加入 1 000,200,5 滋g / L
的标准溶液 1 mL,按本实验优化的前处理步骤和液
相色谱检测条件进行测定 .
1郾 6摇 精密度实验
对同一腐乳样品预处理后,HPLC 重复进样 6
次 ,得到的桔霉素峰面积, 并计算相应的标准偏差.
1郾 7摇 实际样品的分析
在北京超市中选购了常见的 5 种不同的红腐乳
产品, 分别采用上述优化的前处理及检测方法对其
进行测定, 根据峰面积,用外标法测得不同腐乳样品
中桔霉素含量.
2摇 结果与讨论
2郾 1摇 高效液相色谱条件的优化
通过比对桔霉素标品和红腐乳提取物的液相色
谱图, 找到桔霉素在红腐乳提取物中的出峰位置, 改
变液相色谱条件优化桔霉素在红腐乳提取物中的分
离度. 主要对流动相中乙腈和磷酸水溶液的比例进
行了优化[12 - 13] ,分别采用乙腈与磷酸水溶液的体积
比为 35颐 65,40颐 60,45 颐 55,50 颐 50 作为流动相, 对同
一腐乳样品进行色谱分析 ,依次如图 1 中 (a) ~ (d).
由图中可以看出 ,随着流动相中乙腈比例的提高 ,洗
脱能力提高,物质的出峰时间提前,桔霉素的出峰时间
逐渐缩短,峰形由宽变窄,与相邻峰之间的分离度也有
降低的趋势. 综合考虑,最终选择 V( 乙腈)与 V( 水) 之
比为 45颐 55,流速为 1 mL / min 作为检测桔霉素液相色
谱条件. 在此色谱条件下,1 000 滋g / L 的桔霉素标准品
溶液色谱图为图 1(e),出峰时间为 7郾 310 min,峰形良
好,且与相邻峰能够实现基线分离.
2郾 2摇 线性范围与检出限
在本实验色谱条件下,测定桔霉素的标准溶液系
列,以桔霉素质量浓度为纵坐标,HPLC 测得的峰面积
为横坐标绘制标准曲线,见图 2. 由图 2 可知,在 0郾 5 ~
67 食品科学技术学报 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2014 年 7 月