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第 36 卷 第 2 期摇 摇 摇 摇 摇 摇 宋摇 杏等: 植物乳杆菌 Y42 无细胞培养上清抑制单增李斯特菌生物膜形成研究 3 7

置于含有 2 mL 新鲜 LB 培养基的 6 孔酶标板内,所 著性检验采用单因素方差分析(ANOVE,LSD)。 所
述 LB 培 养 基 内 补 充 有 200 滋L 浓 度 分 别 为 1 / 2 有数据均表示为平均值 依 标准误差,在 95% 水平用
MIC,1 / 4 MIC,1 / 8 MIC,1 / 16 MIC、1 / 32 MIC 的 Y42 ANOVA 分析方法进行数据显著性分析,p < 0郾 05 表
上清和 20 滋L(1 伊 10 CFU/ mL)LM 菌悬液悬液。 对 示差异显著。
7
照孔内只含有 2 mL LB 培养基,37 益孵育 24 h,然后
用 0郾 1 mol/ L PBS(pH 值 7郾 3)冲洗 3 次,除去未黏附的 2摇 结果与分析
菌体,用质量浓度 0郾 1 g/ mL 结晶紫染色 5 min,再次洗

去盖玻片上未结合的染液,晾干后在光学显微镜 10 伊 2郾 1摇 Y42 上清 MIC 和 MBC 的测定结果
40 放大倍数下观察在盖玻片上形成的生物膜。 通过 96 孔酶标板刃天青显色法和涂布法得到
1郾 3郾 6摇 Y42 上清对 LM 爬行运动性的影响测定 的植物乳杆菌 Y42 无细胞培养上清液对 LM 的 MIC
实验采用 Li 等 [15] 所述的软琼脂法分析植物乳 和 MBC 结果如图 1。 由 1(a)刃天青显色结果可知,
杆菌 Y42 无细胞培养上清液对 LM 爬行运动性的影 经 240、120 和 60 mg / mL Y42 上清处理后,刃天青没

响,并 稍 作 修 改: 将 50 滋L 过 夜 培 养 的 LM (1 伊 有被 LM 还原为粉红色或粉紫色,而是保持刃天青
7 和 Y42 上清混合后的颜色;而 30 mg / mL Y42 上清
10 CFU/ mL)菌悬液接种于 5 mL 含 1 / 2 MIC、1 / 4
MIC、1 / 8 MIC、1 / 16 MIC 和 1 / 32 MIC Y42 上清的 作用下的刃天青被 LM 菌体还原为粉红色。 由图
LB 培养基中,以未加入上清液的一组作为对照,37 1(b)所示荧光检测结果可知,经 15 mg / mL 和 30
益培养 24 h。 培养结束后,4 益 1 000 r/ min 条件下 mg / mL Y42 上清荧光值与阴性对照组无显著性差
离心 10 min,收集菌体,用无菌 PBS(pH 值 7郾 3)洗 3 异,而 60 mg / mL Y42 上清荧光值与阴性对照组存
次并制成 5 mL PBS 重悬液。 取 10 滋L 重悬液接种 在显著性差异( p < 0郾 05)。 综合以上结果可以确
于软琼脂平板(体积分数 0郾 3% 琼脂)的中心进行斑 定 Y42 上清对 LM 的 MIC 为 60 mg / mL。 由 图 1
点接种,37 益 培养 24 h 后,用游标卡尺测量 LM 的 (c)所示涂布结果可知,120 mg / mL Y42 上清作用
爬行运动直径。 下未看到 LM 单菌落的生长,因此 120 mg / mL Y42
1郾 3郾 7摇 数据分析 上清可将 LM 完全致死,因此,Y42 上清的 MBC 为
数据采用 IBMSPSS20郾 0 软件进行统计,差异显 120 mg / mL。

图 1摇 Y42 上清抑制 LM 的 MIC 和 MBC
Fig. 1摇 MIC and MBC of L郾 plantarum鄄Y42 cell free fermentation supernatant against LM
2郾 2摇 1 / 2 MIC Y42 上清作用下 LM 生长曲线的 量浓度 1 / 32 MIC、1 / 16 MIC、1 / 8 MIC、1 / 4 MIC 和
测定结果 1 / 2 MIC 的Y42 上清作用于 LM 生物膜形成过程。

为了排除由于乳杆菌发酵上清液抑制浮游 LM 浮游 LM 在 1 / 2 MIC 的上清作用下的生长曲线结果
生长而导致生物膜形成量减少的干扰作用,选择质 如图 2。 结果表明,1 / 2 MIC Y42 上清作用下 LM 的